爱滋检测方法和步骤.doc

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1、辽宁省丹东市传染病医院检验科作业指导书第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程文件编号：SH-SOP-017版本：2006-07生效日期：2006-07-01珠海丽珠试剂（双抗原夹心酶联免疫法）检测HIV抗体实验原理本品用钝化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗原宝贝的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其它试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中HIV-1/HIV-2抗体，适用于献血员筛查及临床HIV抗体检测。试剂组成1．HIV抗原包被板12孔×8/8孔×122．HIV酶标记物7ml×1瓶3．HIV阴性对照1ml×1

2、瓶4．HIV阳性对照1ml×1瓶5．20倍浓缩洗液50ml×1瓶6．底物缓冲液7ml×1瓶7．底物液7ml×1瓶8．终止液7ml×1瓶9．封口袋1个10封板膜3张10使用说明书1份操作步骤1.加样：将所需数量的板条固定于板架，每次试验设空白对照1孔，阳性对照2孔，阴性对照3孔分别加入阳阴性对照各50ul，其余孔加入50ul待测样品。2.温育：置37℃温育30分钟。3.洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。4.加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50ul。5.温育：

3、置37℃温育30分钟。6.弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。7.显色：每孔加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，震荡混匀，置37℃温育30分钟。8.终止：每孔加入终止液50ul，轻拍混匀。9.读值：用酶标仪读值，在单波长450nm或双波长450nm/630nm下读取各孔A值。辽宁省丹东市传染病医院检验科作业指导书第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程文件编号：SH-SOP-062版本：2006-07生效日期：2006-07-01判定结果：1．要求：阳性对照A值应≥0.8阴

4、性对照A值应≤0.122.临界值（C.O.）计算：临界值（C.O.）=0.15+阴性对照平均A值注：阴性对照平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按实际值计算。3．结果判断：　　样品Ａ值≥临界值（C.O.）为ＨＩＶ抗体阳性　　　　　　　　　样品Ａ值<临界值（C.O.）为ＨＩＶ抗体阴性　　4.初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，如果复试中任何一孔为阳性则样品视为HIV抗体阳性，对复试结果为阴性的标本请按《全国艾滋病检测技术规范》处理。注意事项：样品的收集及保存1．待测的血清或血浆样品不可用NaN3防腐。2．短期内进行检测

5、的血清或血浆样品可存放于2-8℃，如需长期保存，应置于-20℃。避免反复冻融。试验准备1.本试剂的使用单位必须是经各级卫生行政部门批准的HIV检测实验室。2.整个HIV检测必须符合《全国艾滋病检测技术规范》，严格防止交叉感染。操作时必须戴手套，穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。3.从冷藏环境中取出的试剂盒应平衡至室温后方可打开使用。4.未使用完的预包被板条应置于有干燥剂的封口袋中密封保存。5.若20倍浓缩洗液出现结晶，请置于37℃至溶解后在使用。6.不同批号的试剂组分不可混用。7.本试剂盒及各种废弃物阴按传染性物品处理。实验操

6、作1．试剂使用前应充分摇匀。2．洗涤时各孔均须加满洗液，以防止孔口有游离酶标记物未被洗净。3．结果判读请在反应终止后15分钟内完成。4．测定结果必须以酶标仪读数为准。编写：审核：批准：批准日期：2006年07月01日辽宁省丹东市传染病医院检验科作业指导书第十七节人类免疫缺陷病毒标准操作规程文件编号：SH-SOP-062版本：2006-07生效日期：2006-07-01北京万泰生物试剂目的：本试剂盒定性检测人血清和血浆中的HIV-1/HIV-2抗体，适用于献血员筛查，临床检测及血液制品检测。原理：本试剂和应用双抗原夹心酶联免疫法原理

7、（ELISA）检测血清或血浆样品中人类免疫缺陷病HIV(1+2型)抗体。与包被高纯度基因重组HIV(1+2型)抗原，可与样品中抗HIV抗体反应，加入HRP标记HIV(1+2型)抗原，然后用TMB地物作显色。通过酶表仪检测吸光度，从而判定样品中HIV抗体的存在与否。试剂盒组成：1．HIV酶标板12孔×8/8孔×122．HIV酶标试剂10ml×1瓶3．HIV-1型抗体阳性对照1ml×1瓶4．HIV-2型抗体阳性对照1ml×1瓶5．HIV抗体阴性对照1ml×1瓶6．浓缩洗液50ml×1瓶7．显色剂A液6ml×1瓶8．显色剂B液6ml×1

8、瓶9．终止液6ml×1瓶1.封口袋1个11.封板膜3张12.使用说明书1份使用仪器：加样器温箱洗板机含波长450nm的酶标仪实验方法：1.配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。2.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照３孔，阳性对