白喉疫苗工艺流程菌种上课讲义.ppt

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1、白喉疫苗工艺流程菌种细菌性疫苗种类23白喉破伤风百日咳疫苗……451霍乱伤寒副伤寒百日咳疫苗……卡介苗鼠疫布氏杆菌伤寒痢疾霍乱疫苗……脑膜炎伤寒vi肺炎流感嗜血杆菌多糖疫苗……AC脑膜炎球菌多糖结合疫苗HIB……脑膜炎伤寒vi流感嗜血杆菌多糖疫苗……国药长春所百日咳疫苗伤寒疫苗结合疫苗白喉疫苗国药长春所白喉疫苗一、白喉概述二、病原学三、白喉杆菌的致病力及毒素产生的遗传学四、白喉毒素五、白喉类毒素六、生产工艺七、类毒素的质量检定国药长春所外毒素对神经系统损害细菌产生的外毒素对心肌损害外毒素对肾脏损害白喉曾经

2、是对儿童威胁非常大的传染病。它是由白喉棒状杆菌引起的一种呼吸道传染病主要临床表现为上呼吸道发炎，常常表现在咽部，有时在鼻腔、喉部和气管，白喉疫苗国药长春所白喉流行特点1.传染原：白喉杆菌是严格寄生于人类的细菌没有中间宿主，病人及带菌者是唯一的传染原。2.传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也可通过被污的器具和食物传播。3.易感人群：人对白喉普遍易感，新生儿1岁时白喉易感性达高峰。国药长春所二、病原学1.细菌形态白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈棒状，有着色较深的异染颗粒，革兰氏染色阳性，白喉杆菌无动力，无荚膜，

3、不形成芽孢。国药长春所白喉棒状杆菌显微镜下形态国药长春所国药长春所白喉棒状杆菌显微镜下形态2.培养特性白喉杆菌是需氧菌，最适温度为34～35℃。能分解葡萄糖、麦芽糖和糊精，产酸不产气，能还原硝酸盐，不产生吲哚，不消化蛋白。3.抵抗力⑴.白喉杆菌对抗生素有不同程度敏感，对青霉素和红霉素极敏感。⑵.对消毒剂抵抗力弱，3％苯酚10min可将该菌杀死⑶.不耐热，58℃10mi或100℃1min即可被杀死。国药长春所二、病原学三、白喉杆菌的致病力及毒素产生遗传学1.致病力自然界中动物不感染白喉，只能在敏感动物中造成

4、人工感染。猴、马、家兔和豚鼠对白喉敏感实验室常用的动物是家兔、豚鼠和NIH小鼠。2.毒素产生遗传学白喉是由白喉杆菌产生毒性很强的外毒素引起的。白喉杆菌的产毒基因是由β嗜菌体携带。β嗜菌体感染无毒白喉杆菌后嗜菌体DNA与细菌DNA整合，形成溶原性白喉杆菌而获得产毒能力（PW8株目前用于白喉类毒素生产)。国药长春所四、白喉毒素1.白喉外毒素为棒状杆菌β-噬菌体tox基因表达产物,可与细胞表面的特异性受体结合,干扰蛋白质的合成，对人和动物都引起致死性毒性，如心脏、肾上腺、肝、肾、胰及神经组织等均受到损害。2.白

5、喉毒素是单一多肽，由560个氨基酸组成，分子量为62kDa,等电点pH4.1，在pH6时加热55℃很快失活。3.通过物理和化学方法将其纯化。国药长春所细菌毒素甲醛类毒素毒素经甲醛处理后去除毒性而保留免疫原性五、白喉类毒素国药长春所甲醛浓度温度PH脱毒影响脱毒因素国药长春所温度、pH和甲醛浓度等均影响脱毒效果１.温度越高脱毒越快，超过40℃影响抗原性，一般37～38℃。２.在酸性时脱毒较慢，但游离甲醛含量高，在保存过程中由于甲醛的继续作用，可导致脱毒过甚，并影响毒素的稳定性；在碱性时脱毒快，但抗原性损失较大

6、，一般采用弱碱性。３.甲醛浓度大则脱毒快，但抗原损失大。国药长春所温度升高游离甲醛的浓度低毒素纯度高易发生毒性逆转提高甲醛浓度、脱毒pH、脱毒温度和延长脱毒时间；增加非蛋白氮含量（于精制毒素中加入赖氨酸、精氨酸等）防止或减轻毒性逆转类毒素的毒性逆转国药长春所六、白喉疫苗工艺流程菌种（PW8株）传代扩增3～4代发酵罐培养34～35℃培养对数生长末期收获，甲苯杀菌。离心去菌体收集清液超滤浓缩硫酸铵两段盐析除盐除菌氨离子及无菌检查脱毒甲醛液37℃脱毒试验（家兔）原液检定（浓度、纯度、安全等）Al(OH)3吸附成

7、品检定（安全、效价等）国药长春所七、类毒素的质量检定1絮状单位（Lf）是毒素或类毒素与抗毒素的结合单位，只能代表“量”而不能完全代表活性。使用抗毒素絮状单位标准品来测定类毒素的絮状单位。絮状单位测定毒素或类毒素与相应抗毒素在适当的含量、比例、温度反应时间等条件下可在试管中发生抗原抗体结合，产生肉眼可见的絮状凝集反应，根据抗毒素絮状单位标准品可测定类毒素的絮状单位（Lf）值。2纯度：≥1500Lf/mgPN3安全性试验（豚鼠）国药长春所七、类毒素的质量检定4效价测定类毒素刺激机体产生特异性抗体的免疫应答和对

8、相应抗体的特异性结合反应。⑴小鼠Vero细胞法将标准和待检类毒素2倍稀释3～5个稀释度，皮下免疫NIH小鼠8只（0.5ml/只)，免疫5周采血，根据vero细胞生长情况，以标准品的效价为标准，用平行线分析法进行结果计算。⑵豚鼠毒素攻击法皮下免疫豚鼠10只（1ml/只），免疫4周后用毒素攻击，观察5天根据存活率以标准品的效价为标准，用平行线分析法进行结果计算。国药长春所百日咳疫苗一、百日咳概述二、病原学三、百日咳疫苗发展简史四、