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时间:2020-11-09
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1、实验四-凯氏定氮法测定蛋白质含量【目的】了解凯氏定氮法测定蛋白质含量的方法、意义及应用【原理】蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算系数,即得蛋白质的含量。1.有机物中的铵根在强热和催化剂及浓H2SO4作用下,消化生成(NH4)2SO4,反应式为:2NH2+H2S04+2H+=(NH4)2S04(其中CuSO4做催化剂)2.在凯氏定氮仪器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3,收集于H3BO3溶液中,反应式为:(NH4)
2、2SO4+2NaOH=2NH3↑+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O3.用已知浓度的HCl标准溶液滴定,根据HCl消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算系数,即得蛋白质的含量,反应式为:(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3【操作步骤】基本步骤如下:取样→消化→蒸馏→滴定→计算称取适量样品(约相当氮30mg~40mg),移入干燥的消化管中,加入0.2g硫酸铜,6g硫酸钾及20ml浓硫酸,置于消化炉上小心加热,待内容物全部炭化,泡沫完全消失后,加大火力,并保持管内液体内微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续0
3、.5h~1h。取下放冷待蒸馏用。(建议:消化炉温控时间及温度:1阶段选择温度范围280℃左右,时间为20分钟左右;2阶段选择温度范围450℃左右,待颜色变蓝绿色后继续加热0.5h~1h。1.样品消化NaOH、H2O注入管口,用橡胶管套如后分别置于NaOH、H2O盛器桶内,加液时按面板上相应开关,液体经电磁泵自动流入消化管内,注入毫升数视标尺所注位置而定。2.蒸馏蒸馏过程:(1)观察蒸发炉内水位,不能超过不锈钢电极(如果超过,要先排完水)。(2)关掉排水阀,打开加热电源,打开冷却水(自来水开关),打开绿色蒸汽开关(只需打开任意一组),然后,观察电流表;等电流表升到4A左右,关掉蒸汽开
4、关。待其回到0A后再打开蒸汽开关。电流升到4A后再关掉,这样反复开关(0-10)左右直到蒸汽从塑料管内喷出,让其喷半分钟左右,关掉蒸汽开关,仪器进入正常的待机状态。(3)250ml三角接收瓶中加入2%H3BO350ml和2~3滴混合指示剂,将接收瓶套在蒸馏器的接收管上,并且让管口浸没在H3BO3溶液中。(4)把需要蒸馏的消化管固定在蒸馏器托物架上,然后按面板上NaOH、H2O开关,分别向消化管注入蒸馏水(10ml左右)及NaOH溶液(硫酸用量的5倍,约100ml),然后开启蒸汽开关,向试管内注入蒸汽、进行蒸馏。待接收瓶内液面高于150ml时将接收瓶下移,使接收管离开液面、用少量H2
5、O冲洗出气口,继续蒸馏半分钟,然后取下接收瓶,待滴定用。甲基红乙醇溶液和溴甲酚绿乙醇配溶液指示剂,颜色由酒红色变成绿色。用0.05mol/LHCl滴定接收瓶内的溶液,滴定至(暗)灰色时为止,记下消耗HCL的毫升数。3.滴定按下列式子计算蛋白含量:X—样品中蛋白质的含量,%V1—样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;V2—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;N—硫酸或盐酸标准溶液当量浓度;0.014—1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数;m—样品的质量(体积),g(ml);F—蛋白质系数,按16%计算乘以6.25即为蛋白质。【结果及计算】蛋白质X%=式中:测定范围:含氮在0
6、.1~200mg测定品种:粮食、饲料、食品、乳制品、饮料、土壤、水、药物、沉淀物和化学品等。加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点,硫酸铜为催化剂,硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂。混合指示剂在碱性溶液中呈绿色,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈红色。如果没有溴甲酚绿,可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。此课件下载可自行编辑修改,仅供参考!感谢您的支持,我们努力做得更好!谢谢
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