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1、实验五肝功能及两对半检查一、血清丙氨酸氨基转移酶（ALT)测定一、ALT测定原理ALT催化ɑ-酮戊二酸与丙氨酸之间的氨基转移反应：L-丙氨酸+ɑ-酮戊二酸L-谷氨酸+丙酮酸经一定时间反应后，加入2,4二硝基苯肼终止反应，并与溶液中的两种ɑ-酮酸生成相应的2,4二硝基苯腙，在碱性条件下呈棕红色。但两种苯腙的吸收光谱有差别，在500-520nm差异最大，以等摩尔浓度计算，丙酮酸苯腙的吸光度约为ɑ-酮戊二酸苯腙的3倍。据此特点，可计算出丙酮酸的生成量，藉以推算出ALT活力。ALT二、操作方法对照管测定管（ml）血清0.100.10谷丙基质液0.50混匀
2、，37℃水浴30分钟2,4二硝基苯肼液0.500.50基质溶液0.50混匀，37℃水浴20分钟0.4N氢氧化钠溶液5.005.00混匀，37℃水浴10分钟500nm，对照管调0，观察测定管光度后，从标准曲线查ALT活力单位注：共四份标本，每大组（4人）各做一个标本，整个实验室只作一份对照二、参考值ALT≤40U酶的活力受温度和孵浴时间及PH等影响ALT是肝细胞损伤最敏感指标之一也是判断急性肝炎是否恢复的很好指标二、两对半测定一、原理HBsAg：双抗体夹心法；单克隆抗-HBs包被反应板，加入待侧标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP，当标本中存在H
3、BsAg时，形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入底物显色抗-HBs：双抗原夹心法；纯化HBsAg包被，加入待侧标本，同时加入HBsAg-HRP，当标本中存在抗-HBs，形成HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP复合物，加入底物显色HBeAg：双抗体夹心法；单克隆抗-HBe包被，加入待侧标本，同时加入多克隆抗-HBe-HRP，当标本中存在HBeAg，形成抗-HBe-HBeAg-抗-HBe-HRP复合物，加入底物显色抗-HBe：中和抑制法；单克隆抗-HBe包被，加入待侧标本，同时加入重组HBeAg和多克隆抗-HBe-HRP，
4、形成竞争结合，如标本中抗-HBe含量高，则抗-HBe-HRP与HBeAg结合后形成游离物被洗掉，显色淡抗-HBc：竞争抑制法；重组HBcAg包被，加入待侧标本，同时加入抗-HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如标本中抗-HBc含量高，则抗-HBc-HRP与HBcAg结合少，显色淡二、操作加待测标本0.05ml/孔加酶结合物0.05ml/孔混匀，37℃水浴30分钟洗板：弃去反应板孔内液体，拍干，洗涤液注满反应孔，静置5-10秒，弃液拍干，反复5次，拍干加显色剂:先A0.05ml/孔，再B0.05ml/孔，混匀，37℃避光15分钟终止：终止液0.05
5、ml/孔混匀注：4份标本，每大组（4人）各做一个标本同时检测，每份标本都要做(+)(-)对照，共五个试剂盒。试剂不要弄乱，以防出错三、注意事项1.试剂使用前应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加，注意用力均匀2.加入试剂后要充分混匀3.结果判断10分钟内完成4.按传染病实验室检查规程操作临床意义HBsAg乙型肝炎表面抗原,存在于HBV的外壳部分。血清中检出HBsAg是乙肝的早期诊断指标之一，出现于患者血清转氨酶(ALT)升高前2~8周,到恢复期HBsAg滴度逐渐降低乃至消失。仅为HBV感染的标志，不反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱及预后。抗HBs
6、作为疫苗免疫机体产生的抗体,对HBV的感染具有保护性免疫作用。乙肝疫苗接种者一旦出现除抗HBs以外的标志物,则应视为既往感染。HBeAg在血清中的出现时间稍后于HBsAg,一般血清HBeAg阳性者,HBsAg亦为阳性。是HBV复制活跃的血清学指标，有传染性。急性乙肝患者血清HBeAg持续阳性3个月以上,则有疾病慢性化倾向。抗HBe当血清HBeAg转阴后,可出现抗HBe,说明病毒复制减少,传染性弱。抗HBe不是保护性抗体。HBc包括抗HBcIgM、IgA、IgG、和IgE等。抗HBc IgM是机体感染后最早在血液中出现的特异抗体,急性乙肝时呈高滴度
7、。随着急性乙肝的恢复,抗HBcIgM滴度(以及抗HBc IgA)降低乃至消失。如持续高滴度,则有可能发展成慢性乙肝。研究发现,慢性活动性乙肝患者其抗HBcIgM滴度亦较高,说明HBV复制活跃,是传染性强的指标之一。抗HBc不是保护性抗体。抗HBc在血中呈低滴度且与抗HBs同时存在,是既往感染的标志。此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢
