磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯.ppt

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1、实验四磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯临床生物化学实验室一、实验目的掌握：磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯的基本原理。熟悉：磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯的基本操作。了解：血清甘油三酯测定对于家族性脂类代谢紊乱等疾病诊断的临床意义。二、实验原理血清中甘油三酯(TG)经脂蛋白酶(LPL)作用，可水解为甘油和游离脂肪酸，甘油在ATP和甘油激酶的作用下生成3-磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和H2O2，H2O2与4-APP和ESPAS在过氧化物酶作用下，生成红色醌类化合物，其显色程度与TG的浓度成正比。甘油三酯过氧化物酶PODATPAD

2、P甘油激酶GKLPL甘油+酯肪酸3-磷酸甘油磷酸甘油氧化酶GPO磷酸二羟丙酮+H2O24-氨基安替比林（4-AAP）对氯酚/ESPAS醌亚胺染料三、试剂1.酶试剂：GOOD′s缓冲液（pH7.2）≥30mmol/L甘油激酶≥1KU/L脂蛋白酯酶≥3KU/L甘油磷酸氧化酶≥2KU/L过氧化物酶≥2KU/LATP≥0.5mmol/L4-AAP≥0.3mmol/LESPAS≥0.2mmol/L稳定剂适量2.标准液：甘油三酯2.26mmol/L混匀，37℃水浴5min后，在波长546nm处用"B"管调零，测定各管吸光度值。加入物（μL）空白管（B）标准管测

3、定管SU1U2血清——1515DDW15———标准液—15——工作液1500150015001500四、实验操作五、结果计算TG(mmol/L)＝ĀU/ĀS×Cs（2.26mmol/L）参考范围：血清TG:0.565－1.695mmol/L六、注意事项1.本法使用的酶试剂在4℃避光保存，至少可稳定3-7天，出现红色时不可再用，试剂空白的吸光度应≤0.05。2.血清要及时测定，4℃存放不超过3天，避免TG水解释放出甘油。3.本法线性上限为11.3mmol/L，若所测TG超过了11.0mmol/L,则可用生理盐水稀释后再测。七、方法学评价1.本法是一步

4、终止法，简便、快速、微量且试剂较稳定等优点，适用于手工和自动化测定。2.不足：所测TG值包括了血清中游离的甘油。于4h内立即检测，若放置过久会使结果偏高。3.为了除去游离甘油的干扰，常用下面两种方法：1）外空白法:使用不含LPL的酶试剂测定FG作空白值，但此法需要双份测定，成本加倍。2）内空白法：将酶试剂分成2部分：LPL和4-AAP组成试剂II，其余试剂为试剂I。血清先加试剂I，37℃温育后，因无LPL存在，TG不被水解，FG在GK和GPO的作用下反应生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成显色反应，故可除去FG的干扰；再加试剂II，即可测出T

5、G水解生成的甘油。该法增加了操作步骤，但不增加成本。八、临床意义TG增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。TG降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。