藻类生物学实验室新生培训手册.doc

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1、藻类光生物学实验室新生培训手册欢迎各位新生来到藻类光生物学实验室，在这里你们将度过你们的研究生生涯。为了使你们尽快融入实验室这个大家庭，为了使你们今后能够更好的进行科学研究，本实验室将对所有来到这里的新生进行为期2周的培训，希望大家能够积极参与，enjoyit！【培训内容】●了解实验室规章制度及研究生须知●掌握基本实验技术●培训总结一了解实验室规章制度及研究生须知为了使实验室能够高效、有序的运转，藻类光生物学实验室制定了自己实验室的规章制度，每位在这个实验室学习工作的人员都必须遵守这些规章制度，同时，各位

2、研究生还需要遵守研究生守则，以保证自己能够顺利毕业。培训方式：抄写并熟知相关规则。培训时间：入学第一周第一天二掌握基本实验技术为了能够进行科学研究，一些基本实验技术的掌握是必须的，新生将在实验室技术人员的指导下对实验技术进行熟练操作、掌握。以下是藻类光生物学实验室必须掌握的实验技术，新生在进行实际操作前，必须先对实验原理及步骤进行预习。培训时间：开学第一、二周1.海水二氧化碳系统各分量的计算：气态CO2溶入海水后，一方面服从亨利定律（在一定温度下，气体在液体中的饱和浓度与液面上该气体的平衡分压成正比）：C

3、O2(g)←→CO2(aq)，因此CO2的平衡溶解度[CO2]与CO2的平衡分压pCO2之间的线性关系可表示为[CO2](aq)=KH*pCO2，KH是海水中二氧化碳的溶解度系数与温度、盐度和压力有关;另一方面，CO2还和水反应生成碳酸，CO2＋H2O←→H2CO3，然后，H2CO3分两步电离H2CO3←K1’→H+＋HCO3-－←K2’→CO32-＋2H+K1’=aH+[HCO3-]/[H2CO3]（1）K2’=aH+[CO32-]/[HCO3-]（2）K1’、K2’、分别是碳酸的第1、第2表观解离常数

4、,其中[HCO3－]+2[CO32-]=Ac（3）Ac为碳酸盐总碱度,它跟海水总碱度(AT)有如下关系：Ac=AT-2.206×10-5×Cl‰×KB’/（KB’+aH+）=AT–BCl‰是海水氯度，KB’是硼酸的解离常数当海水温度、盐度确定时，KH、K1’、K2’、B值都可查表得到，这样通过测定海水的pH和总碱度，按下列方程即可计算碳酸盐体系各组分(HCO3-、CO32-、CO2*、∑CO2)的浓度和pCO2。由公式（1）（2）和（3）可得碳酸系统各组分计算公式：[HCO3-]=Ac/(1+2K2’/a

5、H+)[CO32-]＝Ac×(K2’/aH+)/(1+2K2’/aH+)[CO2*]=(Ac×aH+/K1’)/(1+2K2’/aH+)∑CO2＝[HCO3－]+[CO3－]+[CO2*]=Ac×[(1+K2’/aH++aH+/K1’)/(1+2K2’/aH+)pCO2=[CO2*]/KH因为海水中CO2(aq)和H2CO3是无法区分的，所以用CO2*表示两者的总和，以上各参数计算在软件CO2SYS完成(By：Lewis,E.,andD.W.R.Wallace.1998.ProgramDevelopedf

6、orCO2SystemCalculations.ORNL/CDIAC-105.CarbonDioxideInformationAnalysisCenter,OakRidgeNationalLaboratory,U.S.DepartmentofEnergy,OakRidge,Tennessee.)。计算题：当温度是10℃时，pH值为8.3的海水总碱度为2.5×10-3mol/L,盐度是31‰，查表得B值为8×10-5mol/L，CO2溶解系数为4.621×10-2mol/L/atm,pK1’和pK2’分别是

7、5.98和9.10，求海水中各种DIC组分的含量。2细胞色素的定量2.1叶绿素a（chla）、叶绿素c（chlc）和类胡萝卜素【实验原理】根据chla甲醇提取液在665nm处有最大吸收峰，利用分光光度计法测定chla的含量。【实验步骤】1）将藻体置于一定量的甲醇中，放置于4℃的冰箱内过夜处理。2）1500g离心10min，取上清，用分光光度计测定其在750、665、652的OD值。3）按照Porra提供的公式,[Chla](μg/ml)=16.29*（A665－A750）－8.54*（A652－A750）

8、，计算其含量。采用Jeffrey&Haxo的公式计算chlc含量：chlc(μg/ml)=67.3×A635-14.1×A668A635和A668代表波长为635和668的吸收值。采用Strickland&Parsons的公式计算类胡萝卜素含量：Carotenoids(μg/ml)=7.6*[(A480－A750）-1.49*(A510－A750)]2.2藻红（PE）和藻蓝蛋白（PC）1）取约为0.2g的藻体，在研钵内加入一定