基因扩增仪ppt课件.ppt

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1、第八章PCR基因扩增仪(PCRGeneAmplifier)内容提要1.PCR基因扩增仪的工作原理PCR技术的原理及发展PCR基因扩增仪的工作原理2.PCR扩增仪的分类与结构定性PCR扩增仪实时荧光定量PCR扩增仪3.PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除PCR扩增仪的性能指标PCR扩增仪的操作规程PCR扩增仪常见故障的排除4.PCR扩增仪的应用内容提要3.PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除PCR扩增仪的性能指标PCR扩增仪的操作规程PCR扩增仪常见故障的排除4.PCR扩增仪的应用第一节PCR基因扩增仪的工作原

2、理一、PCR技术的发展及原理1971年，Kleppe等人首次在文章中准确、客观地阐述了PCR方法。1985年，美国PE-Cetus公司的KaryMullis等人发明PCR技术。第一节PCR基因扩增仪的工作原理PCR技术的本质是体外核酸扩增，加热使双链DNA解开螺旋，在退火温度条件下引物同模板DNA杂交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物，重复“变性→退火→引物延伸”过程至25-40个循环，呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。第一节PCR基因扩增仪的工作原理PCR的基本原理第一节PCR基因扩增

3、仪的工作原理二、PCR基因扩增仪的工作原理从PCR反应基本原理可以看出，PCR基因扩增仪工作关键是温度控制。第一节PCR基因扩增仪的工作原理PCR仪温度控制水浴锅控温压缩机控温半导体控温离心式空气加热控温第二节PCR扩增仪的分类与结构PCR扩增仪的种类普通PCR扩增仪实时荧光定量PCR扩增仪梯度PCR仪原位PCR仪第二节PCR扩增仪的分类与结构荧光实时定量PCR（real-timequantitativePCR,RQ-PCR）技术在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实地反映了体系中模板的增加，通过检测荧光信

4、号，从而实时监测整个PCR反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。第二节PCR扩增仪的分类与结构实时荧光定量PCR仪金属板式实时定量PCR仪离心式实时定量PCR仪各孔独立控温的定量PCR仪第二节PCR扩增仪的分类与结构金属板式实时定量PCR仪可作为普通PCR仪使用可带梯度功能可容纳的样本量大，无需特殊耗材温度均一性欠佳，有边缘效应，标准曲线的反应条件难以做到与样品完全一致第二节PCR扩增仪的分类与结构ABI7500荧光定量PCR仪MJ公司Chromo4荧光定量PCR仪Bio-rad公司iCycler荧光定量PCR仪第二节P

5、CR扩增仪的分类与结构离心式实时定量PCR仪温度均一性较好使用的是同一个激发光源和检测器，随时检测旋转到跟前的样品，有效减少系统误差可容纳样品量少，有的需用特殊毛细管作样品管，增加了使用成本，也不带梯度功能第二节PCR扩增仪的分类与结构Rotor-Gene3000荧光定量PCR仪LightCycleTM荧光定量PCR仪第二节PCR扩增仪的分类与结构LightCycleTM荧光定量PCR仪结构示意图第二节PCR扩增仪的分类与结构各孔独立控温的定量PCR仪不同样品槽分别拥有独立的智能升降温模块，各孔独立控温，适合多指标快速检测。Smar

6、tCyclerⅡ的软件允许一台仪器同时操作六个样品模块，既满足高速批量要求，又能灵活运用，还可实现任意梯度反应。SmartCyclerⅡ上样不如传统方法方便，而且需要独特的扁平反应管，使用成本较高。第二节PCR扩增仪的分类与结构SmartCyclerⅡ荧光定量PCR仪第三节PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除一、PCR扩增仪的性能指标（一）温度控制温度的准确性温度的均一性升降温的速度不同模式下的相同温度特性第三节PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除（二）荧光检测系统激发光源检测器发光二极管卤钨灯光源超低温

7、CCD光电倍增管第三节PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除（三）软件简便的人性化设计最能满足其需求。新型的PCR仪很注重程序编写的简易性，易学易用，还具有实时信息显示、记忆存储多个程序、自动倒记时、自动断电保护等功能，很多还可以免费升级。第三节PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除（四）其他多样化样品基座设计、热盖等都使PCR仪越来越人性化。第三节PCR扩增仪的性能指标、操作规程及常见故障的排除二、PCR扩增仪的操作规程普通PCR扩增仪的操作非常简便，接通电源，仪器自检，设置温度程序或调出储存的程序运行即

8、可。定量PCR扩增仪的操作和普通PCR仪基本相同。三、PCR扩增仪常见故障的排除第四节PCR扩增仪的应用一、感染性疾病的分子诊断和研究二、遗传性疾病的分子诊断和研究三、恶性肿瘤的分子诊断和研究四、PCR扩增仪在移植配型上的应用五、PC