微生物实验课件：抗酸+血凝+考核.ppt

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1、1.病毒培养（二）之血凝实验2.抗酸染色病毒培养及鉴定（二）之血凝实验血凝试验目的：掌握血凝实验原理及方法。原理：流感病毒表面含HA，该病毒蛋白能与鸡、豚鼠等RBC表面的受体结合而至RBC凝集，该现象称血凝实验，故可用来鉴别流感病毒的存在。Material9-11日龄鸡胚，流感病毒悬液，NS，鸡RBC悬液碘酒，棉签，1ml注射器，照蛋灯，标记笔，孵箱等镊子，吸管，血凝反应板等。Methods照蛋灯下标出气室和大的血管.避开气室和大血管，选一注射点，砂轮磨出一凹槽.碘酒消毒注射点.注射0.2ml流感病毒悬液.封口，37℃3天.Stronghealthybl

2、oodvessels.Embryomoves.Inoculationofembryonatedeggsbytheallantoiccavityroute蛋壳卵膜气室尿囊绒毛膜尿囊腔卵黄囊蛋清30-45°Material接种流感病毒的鸡胚，鸡红细胞，NS镊子，试管，塑料吸管，刻度移液管，血凝反应板，标记笔等。Methods72h后，取出鸡胚放冰箱，收集尿囊液：敲破蛋壳，撕开卵膜及尿囊绒毛膜，塑料吸管吸取尿囊液至试管。血凝实验取一血凝反应板，标记1-10，倍比稀释倍比稀释No.12345678910NS0.90.250.250.250.250.250.250.

3、250.250.25Virus0.1弃0.5ml0.250.250.250.250.250.250.250.25-弃0.25ml0.5%RBC0.250.250.250.250.250.250.250.250.250.25dilution1:101:201:401:801:1601:3201:6401:12801:2560-轻轻混匀,室温40min.Results123456789-++++++++++++++++++++--1:101:201:401:801:1601:320++++所有RBC凝集+++75%RBC凝集++50%RBC凝集+25%RBC凝

4、集-无凝集现象。RBC沉在管底，形成一个圆盘。2.抗酸染色抗酸染色目的：掌握抗酸染色原理及方法。原理：结核分枝杆菌细胞壁含大量脂类，普通染色不能着色，经加热并延长时间后着色，但又不能被盐酸酒精脱色，故可用来鉴别抗酸杆菌。Materials结核患者痰液玻片、棉签、酒精灯、吸水纸、显微镜等染料:石碳酸复红----抗酸Ⅰ液3%盐酸酒精----抗酸Ⅱ液碱性美蓝-----抗酸Ⅲ液Methods制片，干燥，固定。初染:抗酸I液覆盖标本，加热5min。(注:至蒸汽产生,勿煮沸,及时添加染料)冷却后细水流冲洗。脱色:抗酸II液30sec，细水流冲洗。4.复染：抗酸III液

5、1min，细水流冲洗。5.吸水纸吸干，油镜镜检。Result结核分枝杆菌染成红色，其他细菌及背景染成蓝色。结核分枝杆菌细长稍弯，分枝生长。MycobacteriumOthercellsDiscuss为什么结核分枝杆菌不用革兰染色？经抗酸染色后，为什么结核分枝杆菌着红色，而其他细菌着蓝色？为什么不同的细菌着不同颜色?抗酸杆菌非抗酸杆菌石碳酸复红+加热盐酸酒精碱性美蓝实验考核内容镜下观（图片）：选3实物（选2）：1三种葡萄球菌色素2血平板αβ溶血3SS平板4动力实验5生化反应油镜使用（必考）：写出细菌形态、染色、排列方式操作（选1）：1细菌接种：分区划线、液体

6、、半固体2革兰染色3倍比稀释