仪器分析 高效液相色谱法ppt课件.ppt

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1、第十章高效液相色谱法一、HPLC的特点featureofHPLC二、高效液相色谱仪instrumentofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC第一节高效液相色谱的特点与仪器highperformanceliquidchromatography(HPLC)featureandinstrumentofHPLC2021/7/30一、高效液相色谱法的特点featureofHPLC特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。202

2、1/7/30（一）固定相高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0×108～109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。2021/7/30固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。2021/7/301.表面多孔型固定相它的基体是实心玻璃球，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化铝、分子筛等。这类固定相的多孔层

3、厚度薄、孔浅、柱子容量低，相对死体积小，出峰快。2.全多孔型固定相由直径为3-10m的硅胶微粒凝聚而成。这类固定相由于颗粒很细，传质速率快，柱效高。特别适合复杂混合物分离及痕量分析。2021/7/30由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲合力，并参与固定相对组分的竞争，因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：（二）流动相（1）溶剂必须具有合适的极性和良好的选择性；能溶解样品但不与样品发生反应或聚合。（2）选用的溶剂与检测器匹配。2021/7/30（3）高纯度。由于高效液相色谱灵敏度

4、高，对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”；（4）低粘度（粘度适中）；若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。2021/7/30二、高效液相色谱仪器highperformanceliquidchromatograph2021/7/30液相色谱仪（2）2021/7/30液相色谱仪（3）2021/7/30三、高效液相色谱的流程及主要部件processandmainassemblyofHPLC1.流程图动画演示2021/7/302.主要部件高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数

5、据处理系统；此外还有一些附属设备，如梯度洗脱、自动进样装置。(1)高压输液系统（a）高压输液泵：主要部件之一，压力：150～350×105Pa。动画演示2021/7/30应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相，液体的流动相高速通过色谱柱时，将产生很大的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。2021/7/30(b)梯度洗脱装置（梯度洗提、梯度淋洗）所谓梯度洗脱就是流动相含有两种或两种以上不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续改变流动相的配比和极性，以此来

6、改变被分离组分的容量因子k和选择性因子，达到缩短分析时间和提高分离效果的目的。2021/7/302021/7/30高压梯度洗脱:内梯度利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。低压梯度洗脱:外梯度一台高压泵，通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入混合器中混合。2021/7/30(2)进样系统通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：动画演示2021/7/30(3)分离系统柱体为直型不锈钢管，内径2～6mm，柱长10～30cm。发展趋势是减小填

7、料粒度和柱径以提高柱效。2021/7/30在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，比如紫外、荧光等检测器。另一类是总体型检测器，它对试样和流动相总的物理或化学性质有响应，比如示差折光，电导检测器等。(4)检测系统2021/7/30应用最广，对大部分有机化合物有响应。灵敏度高，10-6g/L；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；可用于梯度洗脱。动画演示a.紫外光度检测器ultravioletphotometric

8、detector2021/7/30b.光电二极管阵列检测器photodiodearraydetector紫外检测器的重要发展；由1024个二极管组成，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。2021/7/30光电二极管阵列检测器获得的色谱图2021/7/30c.荧光检测器fluorescencedetector高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲