《食品仪器分析技术》第二章：紫外分光光度计ppt课件.ppt

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1、第二章紫外－可见分子吸收光谱法第四节分光光度计的基本构造和使用流程本节内容一、基本构造二、分光光度计的类型三、分光光度计使用及注意事项四、分光光度分析方法（重点掌握）五、分光光度计的维护和保养（掌握）仪器可见分光光度计紫外-可见分光光度计岛津紫外可见分光光度计UV-mini1240一、基本构造各种型号的分光光度计，通常由光源、单色器、吸收池、检测器和信号指示系统5个部分组成。吸收池1.光源发射强度足够且稳定具有连续光谱的光发光面积应该小应附有聚光镜将光源聚于单色器的入射狭缝钨灯可见光区：有钨灯、碘钨灯（常见）辐射波长范围在350～2500nm紫外区

2、：有氢、氘灯（常见）发射160～375nm的连续光谱氘灯碘钨灯2.单色器作用：将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。入射狭缝准直透镜棱镜准直透镜出射狭缝白光红紫λ1λ2800600500400折射色散组成①入射狭缝（重要）：直接影响到单色光的纯度，过小会减弱光强②准直镜（聚光镜）：将光源发出的发散光变成平行光进入色散元件，又将色散后的单色平行光聚焦进入出光狭缝③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝⑤出射狭缝3.吸收池在紫外区须采用石英池可见区一般用玻璃池

3、0.5、1、2、3cm4.检测器光信号变成可测的电信号5.结果显示记录系统检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理二、分光光度计的类型1.简易分光光度计2.单光束分光光度计三、分光光度计使用流程及注意事项分光光度计使用流程？？？三、分光光度计使用流程及注意事项1检查停止状态，确定所有开关均在关的状态。2接通电源，打开仪器开关。3通过波长调节旋钮将波长选定在试样测定的最大吸收波长处4仪器调零和调满5选择合适的吸收池装满试样和参比样6放入试样池和参比池，注意透光面必须与单透光垂直7测量读数、记录8测量结束后要及时将吸收池取出，恢复。。。吸收池妥善

4、保存第五节分光光度分析方法分光光度计可以进行一、定性分析二、定量分析实验1-3标准铜溶液的配制吸收曲线示意图一、概念二、定性分析（一）定性鉴别定性鉴别的依据→吸收光谱的特征吸收光谱的形状吸收峰的数目吸收峰的位置（波长）吸收峰的强度相应的吸光系数（吸光物质在单位浓度及单位液层厚度时的吸光度）定性分析可以确定：1、官能团的检出及结构鉴定2、纯度检查3、已知化合物的验证4、推测化合物的结构类型5、骨架的判断6、判断异构体7、测定互变异构体二、定量分析（一）单组分的定量方法1．标准曲线法2．标准加入法1标准曲线法标准曲线法的计算公式在一定条件下，标准曲线是一

5、条直线，直线的斜率和截距可以用最小二乘法求得。现在好多仪器软件都能自动生成标准曲线，所以一小部分版友不清楚标准曲线的具体计算方法。本人查找了一些资料，找到标准曲线的斜率和截距的计算方法，和大家分享。工作曲线可以用一元线性方程表示：y=ax+b式中，x为标准溶液的浓度，y为相应的吸光度。使用最小二乘法确定的直线称为回归线，a,b称为回归系数。a为直线的斜率灵敏度灵敏度是指该方法对单位浓度或单位量的待测物质的变化所引起的响应量变化的过程。一般用标准曲线的斜率a为方法的灵敏度，a越大，灵敏度越高。不要小看灵敏度，用处可大了。灵敏度由于仪器的不同，实验条件等

6、的不同，在不断的变化。但在一定的实验条件下，灵敏度相对还是比较稳定的。所以，建议对灵敏度也做个质量控制图，具体做法见我另一个帖子。每次标准曲线做好以后，观察灵敏度是否在一定的范围内维持稳定。如果发现灵敏度突然降低，就需要考虑，是否是仪器出问题了。还有，在打开一瓶新的标准溶液的时候，在仪器进行维修以后，一定要注意灵敏度的变化。2．标准加入法标准加入法曲线的设计：标准加入法中第一次加入标准溶液为“0”（就是什么都不加）；第二次加入的量约与被测液中被测离子的含量大致相等；第三个以此类推，但是请注意，最后一个点一定要在标准曲线的线性范围之内，超出了线性就不好

7、了，影响测定。标准加入法的校正曲线在校正了背景的情况下，如果试样中不含待测元素，校正曲线理应通过原点。现在校正曲线不通过原点，说明试样中含有待测元素，其含量的多少与截距大小的吸光度值相对应。将校正曲线外延与横坐标相交，原点至交点的距离，即为试样中待测元素的含量Cx。标准加入法的局限（即用标准加入法一般须满足的条件）：第一，待测元素浓度从零至最大加入标准浓度范围，必须与吸光度值具有线性关系，并且标准曲线通过坐标原点。第二，在测定溶液中的干扰物质浓度必须恒定。第三，加入标准物质产生的响应值与原样品中待测元素产生的响应值相同。第四，不能存在相对系统误差，即

8、试样的基体效应不得随被测元素含量对干扰组分含量比值改变而改变。第五，必须扣除背景和空白值。第六节分光光度计的