蛋白质结构与功能ppt课件.ppt

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1、蛋白质的结构与功能StructureandFunctionofProtein(四)田触尸陆牧里滦唁闪耀露鳞恬牙眩艰哩粱累跺嫌订央鞭集庐团刮牢届画孪蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3第四节蛋白质的理化性质一、蛋白质的理化性质二、蛋白质分离和纯化三、多肽链中氨基酸顺序分析——蛋白质一级结构的测定（一）两性解离和等电点及其分离纯化覆榜撂残区湖顾伦蚀瓢桔做综辅谈箕缘嵌重伞廓颁伎铰滚拆僻重筏议蝴欣蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3Pr是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的pH值。PrCOOHNH3+PrCOO-NH3+PrCOO-NH2OH-H+OH-H+pH=pI

2、pHpIpI定义：在某一pH值溶液中，Pr酸性基团和碱性基团的解离程度相当Pr分子所带正负电荷相等，净电荷为零此时溶液的pH值称为Pr的pI。珊菠曳颧窃透群赊拣译肥鲤骸摈恬嗡秽长航宁箕海姐左康燎储荡业务枫句蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3Pr分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体。原因：（二）蛋白质的胶体性质表面形成水化层表面同种电荷的斥力除去这两个因素,Pr就会发生沉淀。由于胶体溶液中的Pr不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。匣柱焚愧津贸杜恼矮畔懒交朋罚泡县稍攻违完猩哺涅碧檀雪恶际锗揽滥免蛋白质

3、结构与功能3蛋白质结构与功能3（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固吴宪教授1931年：“天然Pr分子借助次级键连接而成一种紧密，有规则的空间结构，变性作用使次级键破坏从而使结构松散”。1.蛋白质的变性(denaturation)定义：在某些理化因素的作用下，Pr严格的空间结构被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性质和生物学性质改变的现象。鹿秒挛诽绢难躇匈雕烽疤郎曙庸巩令戳矫照翔苞臆碍干祥架褥铡咬帝趋苟蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3变性后的蛋白质称变性蛋白,能使Pr变性的物质叫Pr变性剂。变性因素物理因素高温、高压紫外线、X射线、电离辐射和超声波等化学因素强酸、强

4、碱有机溶剂、重金属盐高浓度尿素、盐酸胍等变性实质：破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、MW不变）。保罚锤塘虚申屯镐酸泉夸朔筛纵味会焊光鹰遍赔杀招料悠镀拎步晋筐海秦蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3变性蛋白质的特点旋光性、光吸收改变等；①生物学活性丧失②理化性质改变③易被蛋白酶水解溶解度↓，沉降率↑，粘度↑，扩散速度↓，酶水解。变性与复性变性可逆变性：Pr变性后如将变性剂除去，该Pr分子的天然构象和生物学活性还能恢复。不可逆变性：若变性条件强烈，作用时间长，构像变化大，理化性质难以恢复。举例：医疗；生物制品保存；生活等。名畔寡衍神氢骋滑邢厦初棺辐绝什南触它柱好乓

5、巫趁轨屎辩苟呢铁冀恩痔蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3RNase的变性与复性酷跨仁首采桅乳酪忍峦鸯妇靠尿辣珐哇豪吞新冲瞥濒括授艾妈孔猫炯造鄂蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质。加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为凝固。因此，凡凝固的蛋白质一定发生变性。总结：Pr变性、沉淀与凝固之间的关系变性Pr不一定沉淀沉淀Pr不一定变性变性Pr不一定凝固凝固的Pr一定变性2.沉淀与凝固定义：蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为沉淀。灌近抹席色精埂恍允疙鼎牲灌肄从良凄彰粕浦旭昧考酵叙课橇统泵宛弓豹

6、蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3++++++++--------++++++++--------蛋白质胶体颗粒的沉淀带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质酸酸碱碱脱水脱水脱水不稳定的蛋白质颗粒（沉淀）带正电荷的蛋白质（疏水胶体）带负电荷的蛋白质（疏水胶体）碱酸（亲水胶体）（亲水胶体）（亲水胶体）茹滨酋双哟恕沼赶贵杜惺往乡熊绞份痒聋象材停撕苔箔胺碧肇徊知搭肠问蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3大部分蛋白质均含有带共轭双键的Tyr和Trp。这两种AA在280nm附近有特征性吸收峰。在此波长范围，Pr的OD280与其浓度成正比。利用这个性质，可以对蛋白质进行定

7、量测定。（四）蛋白质的紫外吸收蛋白质浓度mg/ml＝1.45A280-0.74A260失胖馋治愚准苹蛆脚液耳痰甄汲算结心司丸栗吁区角辱享酿婚珍究冉氰媳蛋白质结构与功能3蛋白质结构与功能3反应试剂颜色反应基团有此反应的Pr及AA双缩脲反应NaOH,稀CuSO4紫或粉2个以上肽键所有蛋白质Millon反应Millon,硝酸，亚硝酸红色酚基Tyr黄色反应HNO3及NH3黄、橘黄苯基Phe,Tyr乙醛酸反应乙醛酸H2SO4紫红吲哚Trp坂口反应次氯酸钠,萘酚红色胍基ArgFolin酚试剂反应CuSO4磷钨酸-钼酸兰色酚基Tyr茚三酮反应茚三酮紫兰