侦测食品中之微生物.doc

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1、DetectingMOinFoodsAims1.Tounderstandthetraditionalmethodsandrapidmethodsfordetectingmicroorganismsinfoods2.Tounderstandtheprinciples,advantages,limits,andapplicationforeachdetectingmethod3.Tounderstandtheissuesofthemetabolicallyinjuredmicroorganisms(MO)andthevia

2、blebutnon-cultivableMO(VBNC)Outline1.Homogenizationmethods2.Standardplatecount(SPC)3.Spiralplatecount4.Membranefiltrationmethods5.Microscopeplatecount6.Petrifilm7.MPN8.Directmicroscopiccount9.Dyereductiontest10.DetectingMOonsurfaces11.Metabolicallyinjuredmicroor

3、ganisms12.Viablebutnon-cultivablemicroorganisms(VBNC)13.Phisical,chemical,molecular,andimmunologicalmethods§均質法（Homogenizationmethods）WaringBlendorvs.StomacherWaringBlendor為廣泛使用方法(除了有刺、尖銳之食品外)，優點：1.免於清洗、殺菌操作2.正常操作時間內（≦2min）不生熱，不影響菌數3.噪音低4.均質液易貯藏5.不會引起食品組織（細胞）之高度

4、破碎，容易吸取樣品，而且，降低來自食品組成份之干擾（尤其在非SPC偵測法）9-1§標準平板法〔StandardPlateCount(SPC)〕，活菌數1.計數：25~250cfu（或30~300cfu）2.假設：(1)各培養皿中之菌落源自單一菌體。(2)所提供之條件（營養、溫度等）足以使食物中所有菌生長，而產生菌落。3.方法：(1)混稀法（pourplatecount）(2)塗抹法（spreadplatecount,surfaceplatecount）塗抹法優缺點（與混稀法比較）(a)無熱傷害(b)有利好氧菌快速生長(

5、c)容易計數(d)可自動化操作(e)菌落易分離§螺旋平板法（Spiralplatecount）1.所用培養基、平板、稀釋液、吸管均較少2.快速，50~60plate/h3.易受食物顆粒阻塞1.設備費用高9-2§膜濾法（Membranefiltrationmethods）l適用於水、飲料、或空氣等菌數低者l可能需預濾，以去除食物顆粒，或添加酵素、介面活性劑等以利過濾1.直接螢光過濾法（DirectEpifluorescentFilterTechnique，DEFT）留於濾膜上之菌株，以螢光染劑，如acridineoran

6、ge染色，再以螢光顯微鏡計數操作：Foodhomogenate↓5μmnylonfilter↓filtrate,＋2mlTritonX-100&0.5mlTrypsin↓0.6μmNucleoporepolycarbonatefilter↓filterstainedwithacrineorange↓count2.Microcolony-DEFTFiltrationlMicrocolonymethod：Sample→filter→plate,incubatefor3~6h→microscopiccountlMicroco

7、lony-DEFTmethod：(nucleoporemembrane)Sample→filter→plate,andincubated→acridineorangestain→fluorescencemicroscopiccount9-33.疏水性格膜過濾法（HydrophobicGridMembraneFiltration,HGMF）(1)1600waxgrid/membrane(2)減少稀釋操作(2)已有分析項目totalcoliformsfecalcoliformsSalmonellaeE.coliO157:H

8、7§顯微鏡菌落計數（Microscopecolonycounts）0.1mlsample＋2mlnutrientagar→mix→spreadovera4cm2areaonaglassslide→incubated3~8hinawarmmoistchamber→airdried,flame-fixed,stainforcountw