流式细胞操作步骤.doc

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1、流式细胞操作步骤：1.制备脾细胞悬液1´107/ml2.每个流式管（即样品）放入100ul细胞悬液3.每个样品中加入2ulCD4及5ulCD5，避光孵育30分钟4.洗涤：每个样品中加入2ml的流式缓冲液，1200rpm下离心7分钟，弃上清后漩涡混匀，再重复洗涤一次，共两次5.每个样品中加入1mlFoxp3固定/渗透液，混匀后4℃过夜6.每个样品中加入2ml流式缓冲液7.室温下1200rpm离心（400g×5min），弃上清8.重复步骤（6），（7）9.每个样品中加入小鼠血清2ul，室温下孵育15分钟10.每个样品中加入2.5ul的Foxp3抗体，室温下孵育30分

2、钟，并用PERatIgG2a在平行管中空白对照11.每个样品中加入2ml流式缓冲液，室温下1200rpm离心（400g×5min），弃上清12.重复步骤（11）13.每个样品中加400ul流式缓冲液，上机