流式细胞术操作步骤.doc

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1、流式细胞术检测脾脏CD4+、CD8+一、准备实验：1640、PBS缓冲液、铜网、小平皿、剪刀、镊子、离心管、红细胞裂解液、枪头、抗体、细胞计数板、杀鸡用大剪刀、1ml注射器二、实验操作步骤：1、取一小块雏鸡脾脏，放入装有1ml1640的1.5ml离心管中2、铜网+平皿中加入1ml16403、将脾放入铜网中，磨脾4、吸取磨好的脾汁放入1.5ml离心管中，离心2000r,5min5、弃去上清，向脾汁沉淀中加入500µl红细胞裂解液，混匀作用3min,离心2000r5min6、若离心后得到沉淀不变白可重复上述操作7、裂

2、解完成，离心完成，弃去上清，向试管中加入1mlPBS混匀8、向1.5ml离心管中加入490µLPBS，再加入10µL步骤7脾汁，计数9、取106个细胞加PBS定容至100µL，此处用1.5ml离心管10、向细胞悬液内加入抗体，每只鸡两管细胞悬液，每管10µL11、4℃避光保存45min12、向细胞悬液中加入1mlPBS2000r5min13、弃上清，向管中加入200µLPBS上机