液相色谱柱效测定.doc

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1、高效液相色谱柱柱效测定及分离条件考察一、实验目的1．了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理2．学习高效液相色谱仪的使用3．学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法二、基本原理高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。气相色谱中评价色谱柱柱效的方法及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：式中：tR为组分的保留时间Y1/2为色谱峰的半峰宽度Y为色谱峰的峰底宽度影响高效液相色谱分离的因素很多，其中，流动相的种类及配比是最重要的参数。三、仪器和试剂1．仪器：Agilent1200高效液相色谱仪（

2、紫外检测器）2．50μL微量进样器3．试剂：苯、萘、联苯、甲醇均为分析纯；纯水为重蒸的去离子水。四、实验条件1．色谱柱长15cm，内径4.6mm，装填5mm的C-18烷基键合固定相2．流动相组成1：甲醇:水（95:5）；组成2：甲醇:水（85:15）；流量均为0.8ml/min3．紫外光度检测器波长254nm4．进样量5μL五、实验步骤1．设定流动相为“组成1”的比例，按照标准操作步骤将仪器调节至进样状态，待仪器流路及电路系统达到平衡，且色谱基线达到平直时，开始进样。2．吸取5μL苯、萘、联苯的甲醇溶液进样，在此条件下用色谱工作站记录色谱数据。3．改变流动相比例至“组成2

3、”，待平衡后重复步骤2操作。4．用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据。六、数据记录及处理1．记录实验条件。（1）色谱柱与固定相（2）流动相及其流量、柱前压（3）检测器波长（4）进样量2．分别记录三个组分色谱峰的保留时间tR和相应色谱峰的半峰宽Y1/2。3．分别计算苯、萘、联苯在两种流动相组成条件下的理论塔板数n，并比较流动相组成改变前后色谱分离的差异。七、思考题1．由本实验计算出的各组分理论塔板数说明什么问题？2．紫外光度检测器是否适用于检测所有有机化合物，为什么？3.试分析流动相条件改变后保留时间及分离度的差异，并阐明原因。