实验报告甘氨酸的含量测定.doc

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1、甘氨酸的含量测定——电位滴定法生药1011第四组一、应用范围：本方法采用滴定法测定甘氨酸原料药中甘氨酸的含量。本方法适用于甘氨酸原料药。二、方法:供试品无水甲酸溶解后，加冰醋酸，照电位滴定法，用高氯酸滴定液滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，根据滴定液使用量，计算甘氨酸的含量。三、原理：氨基酸分子中含有一NH2和一COOH，为两性物质，在水溶液中，它的酸式电离和碱式电离的趋势都很弱(如氨基乙酸其羧基上的氢Ka=2．5×10-10，氨基作为碱Kb=2．2×10-12)，因此无法准确滴定。但在非水介质(如冰乙酸)中，可以用HC104作滴定剂，结晶紫为指示剂准确滴定氨基酸，产物为氨基酸的高

2、氯酸盐，呈酸性。结晶紫在强酸介质中为绿色，pH=2左右为蓝色，pH>3时为紫色，可以指示此反应的滴定终点。(由紫色到蓝色到蓝绿到绿色到黄色变化)四、实验材料1、试剂：（1）冰醋酸（2）无水甲酸（3）高氯酸滴定液（0.1mol/L）（4）结晶紫指示液（5）基准邻苯二甲酸氢钾2、仪器设备：电位滴定仪、酸度计或电位差计、容量瓶、烧杯、磁力搅拌器、搅拌子等五、操作步骤1.高氯酸滴定液（0.1mol/L）试样制备配制：取无水冰醋酸（按含水量计算，每1g水加醋酐5.22mL）750mL，加入高氯酸（70~72%）8.5mL，摇匀，放冷，加无水冰醋酸适量使成1000mL，摇匀，放置24小时。若所测

3、供试品易乙酰化，则须用水分测定法测定本液的含水量，再用水和醋酐调节至本液的含水量为0.01%~0.2%。2.结晶紫指示液取结晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解。3.标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g，精密称定，加无水冰醋酸20mL使溶解，加结晶紫指示液1滴，用本液缓缓滴定至蓝色，并将滴定结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。4.酸度计的校正（1）接通电源，开机预热5min。（2）用蒸馏水冲洗电极，并用滤纸吸干，然后将电极放入pH已知的标准

4、缓冲溶液中（pH6.864）摇动烧杯，使电极前端玻璃球与标准缓冲溶液充分接触。转动标定旋钮，使仪器度数等于标准缓冲溶液的pH值。标定完成后将电极清洗干净，并用滤纸吸干。同样的方法再标定pH4.003的标准缓冲液。5.供试品的电位滴定精密称取供试品约70mg，加冰醋酸25mL，照电位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于7.507mg的C2H5NO2。注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。六、实验结果1.原始

5、数据（1）标定项目标定1标定2平均值HC104滴定量／mL5.55.45.45（2）电位滴定V/mL024566.36.56.76.97E/mv3623864124314855265856246456522.数据处理（1）标定KHP+HClO4——H2P+KClO4所以，高氯酸滴定液浓度C=0.1438mol/L（2）甘氨酸含量测定G+HC1O4——HGC1O4甘氨酸含量=原始数据一阶微分二阶微分V/mLE/mv△E／△VV△E／△VV03621210.52238613343.754412194.53555431545.5127.75.82564851376.156326.2756.

6、35262956.4﹣5006.56.55851956.6﹣4506.76.76241056.8﹣233.36.8756.9645706.957652由二阶微分法知滴定终点为6.4mL所以，甘氨酸含量==98.70%MKHP=VHClO4CmKHP0.16204.2=5.45*10-3CCVHClO4MGm=5.45*10-3C×100%0.1438×6.4×10-3×75.070.07×100%电位滴定法将盛有供试品溶液的烧杯置电磁搅拌器上，浸入电极，搅拌，并自滴定管中分次滴加滴定液；开始时可每次加入较多的量，搅拌，记录电位；至将近终点前，则应每次加入少量，搅拌，记录电位；至突跃点

7、已过，仍应继续滴加几次滴定液，并记录电位。滴定终点的确定用坐标纸以电位（E）为纵坐标，以滴定液体积（V）为横坐标，绘制E－V曲线，以此曲线的陡然上升或下降部分的中心为滴定终点。或以△E／△V（即相邻两次的电位差和加入滴定液的体积差之比）为纵坐标，以滴定液体积(V)为横坐标,绘制（△E／△V）-V曲线，与△E／△V的极大值对应的体积即为滴定终点。也可采用二阶导数确定终点。根据求得的△E／△V值，计算相邻数值间的差值，即为△<2>E／△V<2>，绘制（△<2>