昆虫DNA提取方法.docx

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1、昆虫DNA提取方法1实验目的提取样品DNA2适用范围本标准操作规程适用于小型昆虫（如稻飞虱、果蝇、蚂蚁等）样本DNA提取，非此类样品DNA的提取流程与本标准操作规程不同，须按照其它样品DNA提取操作规程进行。3实验原理SDS是阴离子表面活性剂，溶解膜蛋白破坏细胞膜，使蛋白变性沉淀下来。4实验仪器高速离心机、水浴锅、振荡器、-20℃冰箱。5试剂耗材试剂用量1%SDS裂解液500ulProteinaseK30ulRNaseA1ul5M/LNaCl300ul异丙醇约750ul75%乙醇2ml0.5MEDTA50ul巯基乙醇2ul1%SDS裂解液配方：配制规模：50ml试剂名称用量1M/LTri

2、s-Hcl500ul5M/LNaCl200ul0.5M/LEDTA1ml10%SDS5ml注意：10%SDS最后加入，避免出现大量泡沫，定容时注意泡沫，等泡沫消了后再定容6实验步骤1)从无水乙醇中取出单只昆虫，用PBS洗涤（若非无水乙醇浸泡保存，可忽略此步骤）。2)将昆虫放入1.5mlEP管中，将EP管放入液氮中，将虫体冻脆，用小研磨棒研碎。3)加入50ul0.5MEDTA，500ulSDS，30ul蛋白酶K，2ulβ-巯基乙醇。4)55℃水浴过夜。5)12000rmp/min，离心10min。6)取上清，加入200ul5MNaCl，-20℃放置5min。7)12000rmp/min，离

3、心10min。8)重复上步骤直到没有蛋白沉淀为止（5MNaCl最多加两次）。9)取上清，加入等体积预冷的异丙醇，-80℃放置30-60min。10)12000rmp/min，离心10min。11)弃上清，收集沉淀。12)用预冷的70%乙醇洗涤沉淀2次，晾干沉淀。13)加入50ulddH2O或TE，混匀溶解。1)加入1ulRNA酶，37℃水浴25min。