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时间:2020-09-11
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1、1.目的为确定本公司水质中菌落总数、大肠菌群测定使用方法,明确菌落总数、大肠菌群检测相关细则,指导人员正确作业,确保检测工作正常开展,根据《生活饮用水标准检验方法》GB5750.12-2006制订本方法作业指导书。2.适用范围适用于水质中菌落总数、大肠菌群的测定。3.职责检测人员严格按照本指导书要求开展检测工作。4.检测依据标准及检测方法《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006《生活饮用水标准检验方法》GB5750.12-20065.标准值表1二次供水菌落总数、大肠菌群序号指标限值01菌落总数100CFU/mL02大肠菌群不得检出6.检验仪器及设备
2、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、冰箱、显微镜、PH试纸。7.试剂和材料营养琼脂培养基,三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液,伊红美兰琼脂,革兰氏染色液。8.检测程序8.1菌落总数:取采集的样品1mL于灭菌平皿内,倾入已融化冷却至45℃的营养琼脂15mL,同时做一个平行样和一个空白对照平皿,并立即摇匀。冷却后,翻转平板,置于35℃~37℃恒温箱中,培养48h。计数每个平板上的菌落数。8.2大肠菌群:在5支装有10mL双料乳糖蛋白胨培养液的试管各加水样10mL;在5支装有10mL单料乳糖蛋白胨的试管各加水样1mL,在5支装有10mL单料乳糖蛋白胨的试管各加稀释后的水样(1
3、:10)1mL。轻摇试管,是液体充分混匀,置35℃~37℃培养箱中24h。观察是否产酸产气,若有,需进一步做证实试验。8.3取一环阳性管中的溶液接种到伊红美兰琼脂平板上,置35℃~37℃培养箱中18h~24h,观察菌落形态,典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色,具有金属光泽。8.4挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,于36℃±1℃培养箱中,培养24h。8.5凡乳糖发酵管最终产酸、产气,革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,为大肠菌群阳性。记下证实试验的阳性管数,查总大肠菌群(MPN)检索表得出100mL水样中总大肠菌群的MPN值。9.
4、计算菌落总数计算见式(1):a=b×n………………………………(1)式中:a—表示菌落总数,cfu/mLb—平均菌落数n—表示稀释倍数10.表格样式附录A水质中菌落总数、大肠菌群检测原始记录样式附录A:水质中菌落总数、大肠菌群检测原始记录样式二次供水检测原始记录受理编号:中坚()检[20]号检测项目:细菌总数、大肠菌群检验日期:年月日依据:《生活饮用水标准检验方法》GB/T5750.12-2006一、实验条件:1、实验室温度:℃;实验室湿度:%;2、仪器设备:恒温培养箱(仪字第号);生物显微镜(仪字第号)3、培养基:厂家:批号:厂家:批号:厂家:批号:
5、二、结果:1、细菌总数:放置时间:取出时间:样品编号菌落数(cfu/皿)(℃h)结果(cfu/mL)平皿1平皿2检验者:复核者:日期:年月日日期:年月日2、总大肠菌群:放置时间:取出时间:样品编号培养温度及时间接种样品量结果(MPN值/100mL)10mL(原样)×5管1.0mL(原样)×5管1mL(1:10)×5管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃
6、hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管℃h乳糖蛋白胨℃hEMB平板革兰氏染色镜检℃h乳糖发酵管检验者:复核者:日期:年月日日期:年月日
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