蛋白质含量的测定.doc

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1、蛋白质含量的测定蛋白质浓度测定采用考马斯亮蓝染色法。这一方法基于考马斯亮蓝G-250在一定浓度的乙醇及酸性溶液中为棕红色，当它与蛋自质结合后，变为蓝色。测定方法非常简单，只要将蛋白质样品加到染料试剂中，通过测定595nm处光吸收的增加量可知其结合蛋白质的量。考马斯亮蓝试剂的配制：100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL95%(V/V)乙醇中，加入100mL85%(V/V)磷酸，用蒸馏水定容至1000mL，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G-250，4.7%(V/V)乙醇，8.5%(V/V)磷酸。测定方法：取1.0mL样品液，加5.0mL上述考马斯

2、亮蓝G-250溶液，室温静置2min，在595nm下测吸光度。根据OD值，从牛血清蛋白含量标准曲线中得出蛋白含量。表4-1蛋白质标准曲线的建立方法Table4－1Standardcureofprotein试管编号1234567891011标准蛋白溶液蒸馏水01.00.10.90.20.80.30.70.40.60.50.50.60.40.70.30.80.20.90.11.00考马斯亮蓝G-2505mlOD59500.1300.1990.2600.3100.3670.4320.4360.4920.5420.542图4-5蛋白质标准曲线Table4-5Standardc

3、ureofprotein其标准曲线回归方程为：y=0.0172+6.6164x，R2=0.9976y为595mn的吸光度，x为牛血清白蛋白的浓度