RNA干扰的机理及特点.doc

《RNA干扰的机理及特点.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、RNA干扰的机理及特点08生科2班：刘小东指导教师：赵菲仪（天水师范学院生化学院甘肃天水）摘要:RNAi技术是利用双链RNA降解细胞内同源mRNA而使细胞缺失一定的功能的方法;具有高效性、序列特异性、高稳定性等特点。总共有触发物的加工、目标mRNA的结合、目标mRNA的降解三个主要过程；作为一种基因打靶技术，在细胞功能改造、基因治疗、功能基因组学等方面有着重要的作用。【关键词】:RNAi;mRNA;过程;特点;意义；RNAInterferenceMechanismsandCharacteristics[Abstract]:

2、RNAitechnologyistheuseofdouble-strandedRNAdegradationofcellshomologousmRNAleavingthecellsmissingsomefunction.Itiseffective,sequencespecificity,highstabilityandothercharacteristics.Therearethethreemainprocesses:thetriggerprocessing;thecombinationoftargetmRNAtargetm

3、RNAdegradation.Asagenetargeting.Itisplayanimportantrolesinthetransformationincellfunction,genetherapy,functionalgomicsandsoon.[Keywords]:RNAi;mRNA;Process;Features;Significance；RNAi(RNAinfterence,RNA干涉或RNA干扰)技术是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象,利用内源或外源双链小RNA(doublestrandedRNA,d

4、sRNA)高效、特异性地降解细胞内同源mRNA从而关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程，使细胞靶基因出现缺失的表型。也是有机体防范病毒或转座子诱导DNA突变的一种生理机制,这种现象发生在转录后水平[1],又称为转录后基因沉默(posttranscription-algenesilencing，PTGS)。作为近年来兴起的新型分子生物学技术，由于介导了精确的基因沉默，非常适用于阻滞肿瘤细胞或组织中异常或突变蛋白的表达[2]、或者促进肿瘤细胞衰老的作用[3]。在细胞功能改造、基因治疗、功能基因组学等方面有着重要的作用，并且越

5、来越受到人们的青睐。自安德鲁.法尔1998年在《nature》上报到了对线虫注射外源双链RNA可诱发与该RNA高度同源的基因序列的沉默以来。国外先后报道在水蛙、果蝇、斑马鱼、爪蟾及脊椎动物体内发现有类似的现象[4]，在植物的研究中也发现dsRNA可以诱导细胞产生反应,将外源性RNA及与其同源的内源基因转录产物降解,以防止转座元插入或病毒整合到基因组中导致有害基因突变,这也是植物抵御病毒入侵的一种防御机制。而在病毒体内也有类似的机制。近年来，RNAi研究和应用达到了前所未有的新高度——从RNAi机制原理、RNAi技术在基因功

6、能研究领域的应用，乃至临床应用等众多领域都有大量突破性成果涌现——RNAi已经成为基因功能研究和基因治疗研究等领域的最热门技术之一，仅仅在首次命名RNAi的8年之后，AndrewFire和CraigMello因此荣获2006年诺贝尔生理医学奖。一、RNAi的过程1.触发物的加工研究发现双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)是RNAi的触发物，其有一段非互补的区域将互补的两个区域分开，为了形成一定的结构，非互补区至少含有四个碱基[4]。通常是细胞感染病毒复制时RNA合成的中间产物及一些DNA病毒两条互

7、补链转录产物相互结合、褪火的副产物[2]；他首先引发与之互补的单链RNA(single-strandedRNA,ssRNA)降解。实验室常用cDNA文库技术以其的用途来构建相应的载体，再经过质粒系统进行筛选和序列分析。2.目标mRNA的结合在此过程中小分子干扰核糖核酸（shortinterferingRNA,siRNA）是引物RNA，在此过程中可对目标mRNA起到定位与引导作用。其特征结构为5磷酸基团和3端的羟基，两条链的3末段各有两个碱基突出与末端。而小干扰RNA起作用的关键是双链RNA能与靶mRNA相互结合。其有两个来

8、源：(1)Dicer酶切在RNAi反应过程中，dsRNA被核糖核酶-Ⅲ（Dicer酶）切割为21～23个核苷酸长度的siRNA，siRNA再与含有核酸内切酶的核酶复合物结合形成RNA诱导沉默复合体（RNAinducedsilencecomplex，RISC）[5]。（2）化学合成在一般的实验中可以利用人