唾液淀粉酶实验.doc

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1、.....唾液淀粉酶最适pH值的测定实验实验目的1．掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。2．掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。3．熟悉影响酶促反应速度的因素。实验原理1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度

2、符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。c..........A660PH最适PH实验器材仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔，小烧杯，白瓷板，坐标纸，漱口杯。0.1ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管，胶头滴管，

3、37C恒温水浴箱，分光光度计，电磁炉。试剂药品：0.02％淀粉溶液.0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液碘液；称取碘1g,碘酸钾2g，溶于300ml蒸馏水中。c..........实验步骤：1、缓冲液的配置pH 0.2mol/L0.2mol/LNaH2PO4(ml) Na2HPO4(ml)5.7     93.5           6.55.8     92.0           8.05.9     90.0          10.06.0     87.7          12.36.

4、1     85.0          15.06.2     81.5          18.56.3     77.5          22.56.4     73.5          26.56.5     68.5          31.56.6     62.5          37.56.7     56.5          43.56.8     51.0          49.0c..........6.9     45.0          55.07.0     39.0         

5、 61.07.1     33.0          67.07.2     28.0          72.07.3     23.0          67.07.4     19.0          81.07.5     16.0          84.07.6     13.0          87.07.7     10.5          89.57.8      8.5          91.57.9      7.0          93.08.0      5.3          94.

6、72、唾液的取法：c..........（1）先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉，再将一块消毒脱脂棉球用镊子放在备取者的舌下，过大约半分钟至一分钟，备取者感觉棉球湿透，用镊子将棉球取出，置于烧杯中，倒入蒸馏水，用玻璃棒充分搅拌，将棉球取出，即制成唾液实验备用液。（2）让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。（3）准备一个干净的杯子，用手扯住嘴角，等待大约2分钟后，就可以获得唾液。实验方案（1）唾液的稀释：取10支试管，分别编上号00～09编号0123456789唾

7、液0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1蒸馏水4.99.914.919.924.929.934.939.944.949.9(2)最适唾液稀释倍数的选取取上述稀释的唾液各1ml，分别加入另取的10支试管中，分别编上A~J号的试管里，向10支试管同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37C恒温水浴几分钟后取出，滴加1～2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变为淡黄色最快的一支，记录其稀释倍数，作为下面实验的最适唾液稀释倍数。（3）最适PH的测定编号123456789PH颜色A660c....

8、......A660PH实验结果最适PH=？实验分析思考题1）本实验为什么要寻找较合适的唾液稀释倍数？答：为了跟好的找到唾液淀粉酶的合适浓度，是的最后测定的最适PH精确。2）在研究PH对酶促反应速度的影响是，前提条件是什么？答：温度，底物浓度，酶浓度保持恒定。3）所测吸光度中，吸光度值最小溶液所对应的P