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1、霉菌与酵母菌检测１设备与材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其她设备与材料如下:1。1冰箱:2℃～5℃。1。２恒温培养箱:28℃±1℃。1.３均质器。1、4恒温振荡器、１.５显微镜:１０×～１０0×。1。６电子天平:感量0.1g。1。7无菌锥形瓶:容量5０0ｍｌ、２５0ml。1.８无菌广口瓶:５00mｌ。1、９无菌吸管:1ml(具0.０1ml刻度)、10ml(具0。1ml刻度)。1。10无菌平皿:直径9０mm。1、1１无菌试管:10mm×７5ｍm。1。12无菌牛皮纸袋、塑料袋。２培养基与试剂
2、2.1马铃薯-葡萄糖－琼脂培养基:见附录A中A。１、2、2孟加拉红培养基:见附录A中A。２。3操作方法3。1试验前准备3。１。1将供试品及所有已灭菌得平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管(1ml、10ｍｌ)、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量,避免操作中出入操作间。3。1。2开启无菌室紫外杀菌灯与洁净工作台得空气过滤装置30ｍiｎ。3.１.3操作人员用肥皂洗手,关闭紫外杀菌灯,进入缓冲间,换工作鞋,用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手,穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。３。1。４操作前先用乙醇棉球擦手
3、、工作台面,再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等得开口处周围,待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封、3、2样品稀释液得制备根据供试品得理化特性与生物学特性,采取适宜得方法制备样品稀释液。样品稀释液制备若需用水浴加温时,温度不应超过45℃。样品稀释液从制备至加入检验用培养基,不得超过1小时。3.２.１固体与半固体样品称取２５g样品至盛有２2５ml灭菌蒸馏水得锥形瓶中,充分振摇,即为１:10稀释液。或放入盛有２25mｌ无菌蒸馏水得均质袋中,用拍击式均质器拍打２mｉn,制成1:10得样品匀液、3.2.２液
4、体样品以无菌吸管吸取2５ml样品至盛有2２5ml无菌蒸馏水得锥形瓶(可在瓶内预置适当数量得无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成１:10得样品匀液。3。３霉菌与酵母菌计数3。３。1用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:１０样品匀液１ｍｌ,沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液得无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100得样品匀液、３。3.2按3、3。1操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次１ｍｌ无菌吸管或吸头。３。3.３
5、根据对样品污染状况得估计,选择2个～3个适宜稀释度得样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1ml样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。3．3．4及时将1５ml～2０mｌ冷却至46℃得马铃薯－葡萄糖-琼脂培养基或孟加拉红培养基(可放置于４６℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。3、4培养待琼脂凝固后,将平板翻转,28℃±1℃培养５d,观察并记录。３.5菌落计数肉眼观察,必要时可用放大镜,记
6、录各稀释倍数与相应得霉菌与酵母数、以菌落形成单位(cｏlonｙformｉｎgｕｎｉts,CFU)表示。选取菌落数在１０CFU~１5０CFＵ得平板,根据菌落形态分别计数霉菌与酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板得可记录为多不可计、菌落数应采用两个平板得平均数。3、6结果与报告３.６.１计算两个平板菌落数得平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数计算。３.6.1。１若所有平板上菌落数均大于15０ＣFＵ,则对稀释度最高得平板进行计数,其她平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算、3.6。1、2
7、若所有平板上菌落数均小于1０CＦＵ,则应按稀释度最低得平均菌落数乘以稀释倍数计算。３。6.1.３若所有稀释度平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算;如为原液,则以小于1计数。3.6。２报告菌落数在10０以内时,按“四舍五入"原则修约,采用两位有效数字报告、菌落数大于或等于100时,前3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数来表示结果;也可用10得指数形式来表示,此时也按“四舍五入”原则修约,采用两位有效数字。称重取样以ＣFU/g为单位报告,体积取样以CFU/m
8、l为单位报告,报告或分别报告霉菌与/或酵母数。附录培养基与试剂1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基1.1成分马铃薯(去皮切块)??３00g葡萄糖???20.0g琼脂????２0、0g氯霉素???0.1g蒸馏水?1０0０ml1。2制法将马铃薯去皮切块,加１000mｌ蒸馏水,煮沸１０min～20ｍin。用纱布过滤,补加蒸馏水至10０0ml。加入葡萄糖与琼脂,加热溶化,分装后,121℃灭菌2０ｍin。倾注平板前,用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中2孟加拉红培养基2。１成分蛋白胨?5、0g葡萄糖１0。0g磷酸二氢
