人凝血酶抗凝血酶复合物(tat)酶联免疫分析

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时间:2017-12-28

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1、人凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:CSB-E08431h检测范围:0.312ng/ml-20ng/ml最低检测限:0.078ng/ml特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人TAT,且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中TAT含量。说明1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文

2、说明书为准。4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗TAT抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗TAT抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TAT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assayplate):一块(96孔)。2.标准品(Standard):2

3、瓶(冻干品)。3.样品稀释液(SampleDiluent):1×20ml/瓶。4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibodyDiluent):1×10ml/瓶。5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidinDiluent):1×10ml/瓶。6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8.底物溶液(TMBSubstrate):1×10ml/瓶。9.浓洗涤液(WashBuffer):1×20m

4、l/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10.终止液(StopSolution):1×10ml/瓶(2NH2SO4)。需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器6.蒸馏水,容量瓶等标本的采集及保存1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。1.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1

5、000g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2.细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则:首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1m

6、l,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为20ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释20ng/ml,10ng/ml,5ng/ml,2.5ng/ml,1.25ng/ml,0.625ng/ml,0.312ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml,临用前15分钟内配制。如配制10ng/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)20ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。生物素标记抗体的稀释原则:临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好

7、的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。操作步骤实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时

8、,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液1

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