凝血酶-抗凝血酶复合物检测方法建立及初步应用

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1、上海第二医科大学硕士学位论文凝血酶-抗凝血酶复合物检测方法建立及初步应用姓名：陈红兵申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学（免疫学测定）指导教师：罗伟2002.5.1凝血酶一抗凝血酶复合物检测方法的建立及其初步临床应用中文摘要凝血酶一抗凝血酶复合物(thrombin—antithrombincomplex，TAT)是体内凝血酶原激活成凝血酶(thrombin，Z)后，迅速被抗凝血酶(antithrombin，AT)结合，生成共价键相连的无活性不可逆复合物TAT，由此维持凝血一抗凝血之间的生理平衡，目前认为该复合物的形成是凝血酶生成的直接证据，标志凝血系统的激活。检测TAT的血浆水平可以监测

2、凝血系统的激活情况，是研究生理病理状态下凝血系统行为的一项有用指标。一一、{TAT在形成过程中，凝血酶裂解抗凝血酶的Ar9393-Ser394位肽键，并以凝血酶丝氨酸活性中心Ser205结合抗凝血酶的Ar9393位，两者构象均发生一定的改变，呈现出一定的新抗原表位。因此，用TAT免疫小鼠来制备单克隆抗体可以得到针对T时减少与TAT前体分子的交叉反利用肝素一SepharoseCL一6B高和特异性好的单克隆抗体，同柱从人血浆中提取凝血酶和抗凝血酶，然后两者按一定比例体外反应，即可得到浓度和纯度均较高的TAT复合物(同时含有少量AT和多余的凝血酶)。以该反应的混合物免疫小鼠，我们制备了一系列特异

3、和非特异针对TAT的单克隆抗体，并得到了特对AT和特异针对凝血酶的单抗。经过抗体配对试验，用针对TAT的凝血酶部位的Ⅺ号单抗作捕获抗体，用针对TAT之抗凝血酶部位的Ⅲ号抗体作酶标检测抗体，建立了检测TAT的双抗体夹心法酶联免疫吸附试验。该法的线性检测范围为0．4—63．O!LLg／L，批内cV为3．9％一5．9％，批间cV为9．1％一13．3％，回收率为92．6％一104．9％。加入20“g／ml的AT和凝血酶原对TAT检测无影响。检测50例含高、中、低值的血浆标本，与用美国DADE公司的试剂盒检测的结果比较，两者相关系数为0．969，具有非常显著的意义(P

4、初步临床应用表明，健康年轻女性较健康年轻男性TAT显著增高，孕妇及子宫肌瘤患者TAT显著升高。心肌梗死患者尤其是陈旧性心肌梗死患者TAT上升显著，且与PAP(plasmin—antiplasmincomplex，纤溶酶一抗纤溶酶复合物)、DD(D-dimer，D一二聚体)、FDP(fibrin(fibrinogen)degradationproducts，纤维蛋白(原)降产物]显著相关。肝病、消化道恶性肿瘤、急性白血病患者TAT也显著升高。TAT在预测心肌梗死、监视妊娠、肝炎等高凝状态具有很大意义。以上结果表明，该法可用于检测血浆TAT。为评估生理、病理状态下的凝血系统行为提供了一个有用的

5、工具。1988年德国behring实验室建立了TAT检测方法，他们应用兔抗人凝血酶的多抗作捕获抗体，用兔抗人的抗凝血酶的多抗作检测抗体。与之比较，该法则采用亲和力和特异性均较强的单抗建立TAT检测方法，填补了国内TAT检测能力的空白和国际上该方法学上的空白。／。关键词：凝血酶禽抗凝血酶复合物层折单克隆抗体酶联免疫吸附试验临床应用。、Developmentand鼬dimentalApplicationofanFnz，me-linkedImmosorbentAssaytoDeterminetheTlm妯irr-antitbrunbinComplexinPlasmaAbstractAssoona

6、sactivatedthrombinogentransformstothrombininblood,antithrombinrapidlybindstothrombinbyacovalentbondtoforminactivethrombin-antithrombincomplex，inordertomaintainthebalancebetweenthecoagulationandanti-coagulationsysten_L1hecomplexisadirectindicatorofinvivothrombingeneration．Itisagoodmolecularmarkerto

7、monitorthecoagulationsysteminImthologicalsituations．InTATformation，蚴5ofthrombinbondstoAr9393ofantithrcmbinatthesametimethatcleavageofapartoftheantithrombinpeptideandmodificationofthrombin’Sandantithrombin’Sstruct