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1、检测与分析Detection&Analysis瓶(桶)装饮用纯净水微生物检测方法熊文山(福建省龙岩市产品质量监督检验所,福建龙岩364000)摘要:通过瓶(桶)装饮用纯净水微生物检测过程,指出对样品的取样、培养基的制备及其整个操作过程应注意事项,提高了微生物检测的准确度。关键词:微生物;检验;准确度中图分类号:TS275.1;TS207.4文献标识码:B瓶(桶)装饮用纯净水微生物指标超标[1],人饮7.4,每管分装10ml,放入一个小倒管,115℃高压用后会引起食物中毒,其主要症状为急性胃肠炎症灭菌15min。状,如呕吐、腹痛、腹泻等临床症状。目前饮用纯2.5伊红美蓝
2、琼酯平板蛋白胨10g、磷酸氢二钾净水主要是对细菌菌落总数和大肠菌群进行检测,2g、琼酯17g、溶解于1000ml蒸馏水中,校正pH以此作为判定饮用纯净水被污染程度的指标来评价7.1,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min,备用。水的卫生质量。临用时,加入乳糖10g,并加热溶化琼酯,冷至50～55℃,加入2%伊红Y溶液20ml,0.65%美蓝1设备与材料溶液10ml,摇匀,倾注平板。1.1恒温培养箱36±1℃2.6乳糖发酵管蛋白胨20g、乳糖10g,溶于1000ml蒸馏水,校正pH至7.4,加入25ml0.04%1.2恒温水浴锅46±1℃溴甲酚紫水溶液、每管分装10m
3、l,放入一个小倒管,1.3菌落计数器115℃高压灭菌15min,供大肠菌群证实试验用。1.4放大镜2.7EC肉汤胰蛋白胨20g、混合胆盐1.5g、乳1.5培养皿直径90mm糖5g、磷酸氢二钾4g、磷酸二氢钾1.5g、氯化钠1.6灭菌吸管1ml,10ml5g、溶于1000ml蒸馏水,校正pH至6.9±0.2,每1.7无菌操作台及无菌室管分装10ml,放入一个小倒管,121℃高压灭菌1.8显微镜10×～100×15min。2007年第10卷第6期2培养基和试剂2.1营养琼脂培养基蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1000ml,将以上各成分溶于蒸馏水
4、中,用15%NaOH溶液调整pH至7.2~7.4,加热煮沸后分装瓶,121℃,灭菌15min。2.275%乙醇。2.30.9%灭菌生理盐水。2.4乳糖胆盐发酵管蛋白胨20g、猪胆盐5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25ml、蒸馏水1000ml,将以上各成分溶于蒸馏水中校正pH至2.8革兰氏染色液。3操作方法3.1细菌菌落总数3.1.1以无菌操作用1ml灭菌吸管直接吸取1ml未经稀释水样,或2~3个适宜浓度稀释水样1ml移入培养皿后,即时将凉至45℃的营养琼脂培养基倾注入平皿约15ml,并转动平皿使混合均匀,同时做空白对照,待琼脂凝固后翻转平皿,置36±1℃恒
5、温箱内培养24±2h,取出计数菌落数,作平[收稿日期]2007-05-08[作者简介]熊文山(1959-),男,第二军医大学医学检验专业毕业,助工,在福建省龙岩市产品质量监督检验所从事微生物检测方面的工作。46Detection&Analysis皿菌落计数时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏,记下各平皿的菌落数后,求出同稀释度的各平皿的平均落数。3.1.2细菌菌落总数和稀释度的选择及报告方式(表1)表1细菌菌落总数和稀释度的选择及报告方式例稀释液及菌落数两稀释菌落总数报告方式次10-110-210-3液之比(个/ml)(个/ml)16000或1多不可计164
6、20-164001.6×10438000或2多不可计295461.6377503.8×10427000或3多不可计271602.2271002.7×104310000或4多不可计多不可计313-3130003.1×105270或527115-2702.7×1026000-<1×10<1031000或检测与分析取1ml1∶10稀释液,加入9ml灭菌生理盐水混匀,制成1∶100稀释液,另取1ml灭菌吸管吸取1ml1∶100稀释液加入9ml灭菌生理盐水混匀,制成1∶1000稀释液,选择3个稀释度,每个稀释度取1ml接种3管乳糖胆盐发酵管,置36±1℃恒温箱内培养24±2h
7、,取出观察发酵管,如均未产气,则报告大肠菌群阴性,如有产气则根据阳性管数查MPN检索表,报告每100ml大肠菌群的MPN数。4操作过程体会4.1整个过程都要有无菌观念,对所有玻璃器皿,及培养基都要进行彻底灭菌,冷却后放入无菌室备用。4.2对水样瓶口要进行灭菌处理,取样及移入培养皿,和加入发酵管时一定要用酒精灯燃烧。4.3营养琼脂培养基的温度要控制在45℃。4.4作稀释度稀释时,每次用过的灭菌吸管都要更换,不可多次使用。7多不可计30512-305003.2大肠菌群[2]3.1×104参考文献3.2.1以无菌操作取25ml水样加入225ml灭菌生理
