力达霉素通过诱导DR5表达促进TRAIL诱导人非小细胞肺.ppt

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1、力达霉素通过诱导DR5的表达促进TRAIL诱导的人非小细胞肺癌细胞凋亡杨杰中国医学科学院医药生物技术研究所2010.5（一）研究背景（二）研究结果（三）结论研究背景TRAIL是TNF超家族成员之一，具有Ⅱ型跨膜蛋白的结构特点，分子量33-35kD。TRAIL的细胞外部分可降解后形成可溶性sTRAIL，无跨膜区和胞浆区，具有生物学活性，且可以在体外重组表达。研究背景TRAIL可与存在于肿瘤细胞表面的死亡受体DR4、DR5结合并活化形成三聚体，再募集死亡结构域连接蛋白FADD（Fasassociateddeathdomainprotein），启动凋亡信号

2、。FADD通过死亡效应结构域募集Pro-caspase8到DR4和DR5的受体复合物上，并将其剪切活化为活性caspase8。从而激活相关的下游凋亡通路，最终导致肿瘤细胞凋亡。TRAIL目前已经发展到Ⅱ期临床试验阶段，它可以选择性地杀伤肿瘤细胞和病毒感染的细胞,而正常细胞则通过表达诱骗受体等方式逃逸其杀伤作用,这种特性使其具有应用于肿瘤治疗的巨大潜力。研究背景许多肿瘤细胞对TRAIL存在天然耐药，而且同一组织来源的肿瘤细胞对TRAIL的敏感性也不一致，克服TRAIL的天然耐药性将能促进TRAIL应用于临床。人们对TRAIL与多种其他抗肿瘤制剂联合用药

3、做了大量的研究，结果表明这种联用是有效的。研究背景力达霉素（LDM）是从我国湖北省潜江县土壤中分离的一株链霉菌（StreptomycesglobisporusC-1027）代谢产物中筛选得到的一种新的大分子烯二炔类抗肿瘤抗生素，由一个发色团和一个辅基蛋白组成。研究背景力达霉素主要抑制细胞DNA合成，引起DNA单链和双链的断裂。是迄今已报道的活性最强的大分子蛋白类抗肿瘤抗生素之一。目前在中国正在进行Ⅱ期临床试验的力达霉素在体外对多种肿瘤细胞具有强烈的杀伤作用，在体内对一些移植性小鼠肿瘤及移植于裸鼠的人体肿瘤均具有显著疗效。研究背景ApoproteinG

4、luThrAlaAlaProAlaPheSerValSerAlaProGlyLeuSerAspSerPheThrThrAlaThrSerCysGlyAlaAlaAlaGlySerValValSerValSerGlnGlySerTyrTyrIleAlaGlnGlyAlaAsnGlyThrAlaGlnAspProSerGlyAlaAlaSerPheSerValPheArgLysSerValAlaAlaThrAlaAspCysSerGlyValTyrValProThrGlySerThrThrProGlyGluAsnLeuGlyCysLeuAlaValAla

5、ThrHisGlyAsnSerGlyGlyLeuLeuAspPheGlyCysAlaProValAspClNH2OHOOOCH3OOCH2ONOOOH3CNCH3OHCH3OHOHH3CChromophore许多研究已经表明，损伤DNA的化疗药物能够调节死亡受体的表达，从而促进细胞对死亡受体诱导的凋亡更为敏感。更有研究表明，化疗药物是通过诱导DR4和（或）DR5的表达来促进TRAIL诱导的肿瘤细胞凋亡。LDM作为具有强杀伤作用的抗肿瘤抗生素，它与TRAIL联合作用于肿瘤细胞是否具有协同作用，以及相关的机制又是怎样很值得我们去探究。研究背景（1）测定不

6、同浓度的TRAIL对人非小细胞肺癌H460的增殖抑制作用（2）测定不同浓度的LDM对人非小细胞肺癌H460的增殖抑制作用（3）测定不同浓度的LDM和TRAIL联合对人非小细胞肺癌H460的增殖抑制作用1.MTT试验检测药物对细胞增殖的影响LDM和TRAIL联合用药相互作用指数CDI值AB两药合用时存活率CDI=A药单用时存活率×B药单用时存活率CDI＜1，两药有协同作用；CDI＜0.7，两药有显著的协同作用。2.Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡3.AnnexinV-FITC/PI染色结合流式细胞仪检测细胞凋亡4.LDM与TRAIL联用对T

7、RAIL诱导的细胞凋亡信号通路相关蛋白的影响5.不同浓度LDM对TRAIL受体DR4和DR5表达的影响6.LDM不同作用时间对TRAIL受体DR4和DR5表达的影响结论TRAIL对人非小细胞肺癌细胞系H460细胞增殖的抑制作用LDM对人非小细胞肺癌细胞系H460细胞增殖的抑制作用TRAIL与LDM对人非小细胞肺癌细胞系H460细胞具有显著协同抗肿瘤作用。在合适的剂量下LDM与TRAIL联合应用比单独用药具有更好的疗效，能显著增强对肿瘤细胞的凋亡作用。结论LDM与TRAIL联合可使PARP的切割和Caspase-3及Caspase-8的激活显著增强，从

8、而增强了单药的诱导凋亡作用。LDM能够增强TRAIL受体DR5的表达，不仅有剂量依赖性，且时间越长，表达量越