基因工程产物的分离纯化

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1、基因工程产物的分离纯化.txt11生命是盛开的花朵，它绽放得美丽，舒展，绚丽多资；生命是精美的小诗，清新流畅，意蕴悠长；生命是优美的乐曲，音律和谐，宛转悠扬；生命是流淌的江河，奔流不息，滚滚向前第二节选择分离纯化方法的依据一、根据产物表达形式来选择分泌型表达产物的发酵液的体积很大、但浓度较低，因此必须在纯化前进行浓缩，可用沉淀和超滤的方法浓缩。二、根据分离单元之间的衔接选择应选择不同机制的分离单元来组成一套分离纯化工艺，尽早采用高效的分离手段，先将含量最多的杂质分离去除，将费用最高、最费时的分离单元放在最后阶段

2、，即通常先运用非特异、低分辨的操作单元（如沉淀、超滤和吸附等），以尽快缩小样品体积，提高产物浓度，去除最主要的杂质（包括非蛋白类杂质）；随后采用高分辨率的操作单元（如具有高选择性的离子交换色谱和亲和色谱）；凝胶排阻色谱这类分离规模小、分离速度慢的操作单元放在最后，这样可以提高分离效果。三、根据分离纯化工艺的要求来选择在基因工程产物分离纯化过程中，通常需要综合使用多种分离纯化技术，一般来说，分离纯化工艺应遵循以下原则：（1）具有良好的稳定性和重复性；（2）尽可能减少组成工艺的步骤；（3）组成工艺的各技术或步骤之间

3、要能相互适应和协调；（4）在工艺过程中要尽可能少用试剂，以免增加分离纯化步骤或干扰产品质量；（5）分离纯化工艺所用的时间要尽可能短；（6）工艺和技术必须高效，收率高，易操作，对设备条件要求低，能耗低。（7）具有较高的安全性。第一节基因工程产物分离纯化技术基因工程初产物具有下列特点：①目的产物在初始物料中含量较低；②含目的产物的初始物料组成复杂；③目的产物的稳定性差；④种类繁多；⑤应用面广，对其质量、纯度要求高，甚至要求无菌、无热原等。为了获得合格的目的产物，必须建立与上述特点相适应的产品分离纯化工艺。分离纯化技

4、术应满足下列要求：①技术条件要温和，能保持目的产物的生物活性；②选择性要好，能从复杂的混合物中有效地将目的产物分离出来，达到较高纯化倍数；③收率要高；④两个技术之间要能直接衔接，不需要对物料加以处理或调整；⑤整个分离纯化过程要快，能够满足高生产率的需求。一、细胞破碎与固液分离以大肠杆菌为宿主的基因工程产物多为胞内产物，分离提取这类物质时，需经细胞收集、细胞破碎和细胞碎片分离等步骤。（1）细胞收集常用离心分离的方法；膜过滤法也逐渐得到广泛应用。（2）细胞破碎有机械破碎法和非机械破碎法。可以根据生产规模和活性蛋白质

5、在细胞中的位置，选择适当的方法。机械破碎法是常用的方法，速度快，处理量较大，不会带入其他化学物质；但在处理过程中要产生热量，必要时要采取冷却措施，以防止目的产物失活。常用方法有：高压匀浆法、超声破碎法、高速珠磨法、高压挤压法。非机械破碎法包括酶溶法、化学渗透法、热处理法、渗透压冲击法等。（3）固液分离分离细胞碎片是比较困难的，可以用离心、膜过滤或双水相分配的方法，使细胞碎片分配在一相（通常为下相）而分离，同时也起部分纯化作用。离心沉淀是固液分离的主要手段，包括高速离心和超速离心。常用的膜过滤技术有微滤、超滤和反

6、渗透等。二、目的产物的分离纯化分离纯化主要依赖色谱分离方法。色谱技术是基因工程下游精制阶段的常用手段，该法优点是具有多种多样的分离机制，设备简单，便于自动化控制和分离过程中无发热等有害效应。色谱技术分为离子交换色谱、疏水色谱、反相色谱、亲和色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱等。三、非蛋白质类杂质的去除非蛋白质类杂质不应忽视，在纯化过程中，需要特别注意3种可能存在的非蛋白质类杂质，它们是DNA、热原质和病毒。