质粒DNA的提取及浓度检测ppt课件.ppt

《质粒DNA的提取及浓度检测ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、分子生物学实验任课教师:张淑平(62773628)李英姿(62781668)助教博士生:李颖华(62773628)黄波(62783845)唐颖(62772214)课程基本情况简介/质粒DNA提取基本技术核酸的分离纯化(IsolationandPurificationofDNAandRNA)；电泳技术(GelElectrophoresis)；基因重组、亚克隆及表达（GeneRecombination,SubcloningandExpression)；PCR技术(PolymeraseChainReaction)；分子杂交及互作(Molecula

2、rHybridizationandInteraction)；DNA测序技术(DNASequencing)；基因功能的研究技术(GeneFunction)；基因的染色体定位（LocalizationofGenetoChromosomes）生物芯片技术（Bio-ChipsorBioarray)……..以完整、常用、重要为原则，经典与先进技术相结合，同时介绍相关知识，尽量让学生在有限的学时内掌握更多的分子生物学技术以及相关的知识。我们的分子生物学实验课程的设计从整体上可以说是一个完整的大实验，因为自始至终，各实验之间相互连贯，要求学生每一次实验既

3、得到本次实验的结果，同时也为下一次更深入的实验做准备（提供实验材料）。课程基本情况：次序实验名称周次学时备注1课程基本情况简介/质粒DNA提取36.02质粒DNA酶切鉴定及琼脂糖凝胶电泳45.03聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA56.04DNA回收纯化及重组体的构建66.55大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化及克隆筛选76.56重组克隆的鉴定87.07植物总RNA的提取与电泳95.08核酸转膜、探针标记105.09核酸杂交124.510综合测验、实验讨论与总结134.0实验安排与实验报告注：实验报告分为1－2、3、4(实验6的设计

4、)、4－5、6、7、8－9、10(6)重组克隆的鉴定实验的几点说明手工提取质粒方法将在“实验一”中讲到，“实验六”上课时间将提前到下午1:00；接种培养将在“重组克隆的鉴定”实验课的前一天的晚上进行（7:30-9:00pm?9:00-10:20?）；助博将准备好试管LB培养基，用前别忘了加你需要的抗生素;提供的酶包括EcoRI,XhoI,BamHI,HindIII,XbaI。自己选择正确的酶使用。。实验方案由学生自己设计！要提前进行。(目的意义、材料和方法、结果及讨论)以下几点请注意：实验操作基本要求认真预习实验指导；按照操作规程使用仪器设

5、备,注意个人以及公共设施安全；节约实验试剂及材料；实验完毕后，将实验器皿清洗干净，并清理实验台面；按时、按质、按量完成实验工作，不迟到，不早退；实事求是、认真而及时地写出实验报告。评分考虑平时实验课成绩70%；综合技术测验30%。实验一质粒DNA的提取及浓度检测目的与要求通过质粒的一些特性、质粒DNA的提取、测定，学习用碱变性法提取质粒DNA的方法，了解用分光光度计测定DNA含量的方法。2.相关知识及原理质粒(Plasmid)：独立于染色体外的，能自主复制且稳定遗传的遗传因子。是一种环状的双链DNA分子。存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植

6、物细胞中，在细菌细胞中最多。DNA超螺旋结构细菌质粒:细菌质粒是用的最多的质粒类群，其大小从1Kb-200Kb，它们复制时利用宿主细胞复制自身基因组DNA的同一组酶系。严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控制之下的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以，往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝；松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛控制之下的，每个细胞中含有10-200份拷贝，如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成才会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理才能达到更高拷贝数。质粒类型：载体(Vector

7、)：用于携带重组DNA，并且能够使外源DNA一起复制与表达的质粒(运载工具)。具备的条件：易于鉴定；在受体细胞中可以独立复制；易于筛选；易于导入受体细胞。抗性基因（Antibioticresistancegene,suchasAmpicillinresistancegene,Kanamycineresistancegene)启始复制子（ori,Originofreplication)；多克隆位点(MSC,Multiplecloningsiteorpolylinker)；标记基因(Markergene,suchasLacZgene)。载体的结

8、构：InsertEcoRIXhoI1.9kbDNA是具有一定结构的物质，一些特殊的环境会导致DNA的变性，如加热、极端pH值、有机溶剂、尿素、酰胺试剂等，而适宜的环境又可以使DN