DB44∕T 1991-2017 灵芝及其相关产品中麦角甾醇的测定 高效液相色谱法.pdf

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1、ICS65.020.01B60备案号：57645-2017DB44广东省地方标准DB44/T1991—2017灵芝及其相关产品中麦角甾醇的测定高效液相色谱法DeterminationofergosterolinGanodermalucidumandrelatedproducts—HPLCmethod2017-05-10发布2017-08-10实施广东省质量技术监督局发布DB44/T1991—2017前言本标准编制依据GB/T1.1-2009的规则起草。本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由广东粤微食用菌技术有限公司提出。本标准

2、由广东省质量技术监督局归口。本标准起草单位：广东粤微食用菌技术有限公司、广东省微生物研究所。本标准起草人：谢意珍、焦春伟、张一帆、罗翠婷、李向敏、李洁仪、简伟明、李崇、杨小兵、吴清平。本标准为首次发布。IDB44/T1991—2017灵芝及其相关产品中麦角甾醇的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了用高效液相色谱法测定灵芝及其相关产品中麦角甾醇的方法。本标准适用于灵芝（赤芝）子实体、菌丝体（干品），及其制品孢子粉（破壁孢子粉）和灵芝孢子油中麦角甾醇的测定。本标准检出限为1μg/mL。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的

3、。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T9008液相色谱法术语柱色谱法和平面色谱法GB/T12728食用菌术语3术语和定义GB/T9008以及GB/T12728确立的及下列术语和定义适用于本文件。3.1麦角甾醇ergosterolCAS号57-87-4，分子式C28H44O，分子量396.65，结构式见附录A。主要存在于真菌中，对维持真菌细胞膜完整性和流动性起重要作用的一个化合物，也是测量真菌生物量的

4、指标。4方法提要试样经95%乙醇提取、离心后，取上清液过滤膜，经C18高效液相色谱柱分离，依据保留时间定性，用外标峰面积定量。5试剂和材料除非另有规定，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682中规定的三级水要求，色谱用水符合GB/T6682中规定的一级水要求。5.1甲醇：色谱纯。5.295%乙醇。5.3麦角甾醇对照品（CAS：57-87-4）：纯度≥95%。5.498%甲醇：用甲醇（5.1）980mL，定容至1000mL，混匀，过0.45μm滤膜（5.7）。5.5麦角甾醇标准储备溶液：精确称取10.0mg麦角甾醇标准物质（5

5、.3），用甲醇（5.1）溶解并定容至50mL。使用前配制。1DB44/T1991—20175.6麦角甾醇标准工作溶液：吸取麦角甾醇标准储备液（5.5），并分别以甲醇（5.1）稀释成麦角甾醇浓度为20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL的系列标准工作溶液。使用前配制。5.7滤膜（有机相）：0.45μm。6仪器和设备6.1高效液相色谱仪（带紫外检测器）。6.2万分之一天平（精度为0.0001g）。6.3水浴锅。6.4样品粉碎机。6.5离心机。6.6旋转蒸发仪。6.7循环水式真空

6、泵。7测定方法7.1试样处理7.1.1灵芝子实体：取经过60℃烘干的灵芝子实体（含菌盖和菌柄）进行粉碎（子实体粉碎后呈棉絮状，但不能有明显块状），取粉碎后样品1.00g，加入95%乙醇（5.2）50mL，85℃恒温水浴回流1h，过滤，滤液暂存。残渣再按上述方法提取2次，合并滤液，离心（8800g，10min，不超过25℃）去除不溶物，减压浓缩至小于10mL（不超过60℃），用甲醇（5.1）定容至10mL，过滤膜（5.7），取滤液供色谱测定。使用前提取。过滤膜的滤液要在24h内完成测定。7.1.2灵芝子菌丝体：取经过60℃烘干的灵芝菌

7、丝体进行粉碎，取粉碎后样品（过40目筛子）0.50g，加入95%乙醇（5.2）50mL，85℃恒温水浴回流1h，过滤，滤液暂存。残渣再按上述方法提取2次，合并滤液，离心（8800g，10min，不超过25℃）去除不溶物，减压浓缩至小于10mL（不超过60℃），用甲醇（5.1）定容至10mL，过滤膜（5.7），取滤液供色谱测定。使用前提取。过滤膜的滤液要在24h内完成测定。7.1.3破壁灵芝孢子粉：取破壁灵芝孢子粉1.00g，加入95%乙醇（5.2）50mL，85℃恒温水浴回流1h，过滤，滤液暂存。残渣再按上述方法提取2次，合并滤液，

8、离心（8800g，10min，不超过25℃）去除不溶物，减压浓缩至小于10mL（不超过60℃），用甲醇（5.1）定容至10mL，过滤膜（5.7），取滤液供色谱测定。使用前配制。过滤膜的滤液要在24h内完成测定。7.1.4灵芝孢子油：取