行业标准：DB44∕T 1926-2016 合成基因 质量要求.pdf

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1、ICS03.120G30备案号：54368-2017DB44广东省地方标准DB44/T1926—2016合成基因质量要求Qualityrequirementsforsyntheticgene2016-12-02发布2017-03-02实施广东省质量技术监督局发布DB44/T1926—2016前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由广东省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：深圳华大基因科技有限公司、广东省标准化研究院、广东产品质量监督检验研究院、深圳华大基因研究院。本标准主要起草人：沈玥、胡葳、王娟、陈泰、王云、赵

2、宏翠、谭嘉力、谢强、宋祚锟、杜佳婷、李倩一。ⅠDB44/T1926—2016合成基因质量要求1范围本标准规定了合成基因产品的质量要求、质量检测试验方法及合成的DNA检测报告。本标准适用于合成基因产品质量评价及其检测程序。2规范性引用文件下列文件中对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T

3、19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法JB/T6777紫外可见分光光度计YY/T0087电泳装置YY/T0657医用离心机3术语、定义和缩略语标准GB/T19495.1中界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1术语和定义3.1.1定制序列Customsequence客户提供的DNA序列及合成要求等信息。3.1.2OD260/OD280260nm处光密度与280nm处光密度的比值。注：在分光光度测定分析中，根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。3.1.3OD260/OD230260nm处光密度与230nm处光密度的比值

4、。注：在分光光度测定分析中，OD230代表其他杂质(多糖等)的光密度。DNA纯品的OD260/OD230应大于或等于2。1DB44/T1926—20163.1.4质粒plasmid细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子。注1：参见JJF1265-2010。注2：能稳定地独立存在于染色体外，并传递到子代，一般不整合到宿主染色体上。3.1.5琼脂糖凝胶电泳agarosegelelectrophoresis一种简便高效的分离和纯化DNA片断的方法。注1：参见SN/T2497.21-2010。注2：由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷

5、酸根残基，因此在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。具有不同的相对分子质量的DNA泳动速度不一样，因而可依据DNA分子的大小来使其分离。在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。3.1.6限制性核酸内切酶restrictionendonuclease可以切割双链DNA序列的一类核酸酶。3.1.7DNA测序DNAsequencing分析特定DNA片段的碱基序列，即腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶与鸟嘌呤的排列方式的技术。3.1.8序列比对alignment为确定两个或多个

6、序列之间的相似性和同源性，而将它们按照一定的规律排列并分析的技术。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。EB（EthidiumBromide）——溴化乙啶OD（OpticalDensity）——光密度DNA（Deoxyribonucleicacid）——脱氧核糖核酸4质量评价要求4.1质量等级划分产品质量等级划分见表1：2DB44/T1926—2016表1产品质量等级划分检测产品种类等级指标优符合4.2、4.3、4.4要求质粒DNA或合成的DNA片段合格符合4.2、4.4要求不合格不符合4.2或4.4要求合格符合4.4要求甘油菌液不合格不符合

7、4.4要求4.2合成DNA的纯度和总量4.2.1合成的DNA纯度要求样品溶解在TE溶液（pH7～8.5）中，OD260/OD280的比值应在1.8～2.0之间，OD260/OD230≥2.0。表2所示为合成的DNA纯度要求。表2DNA纯度判断结论指标纯度合格OD260/OD280=1.8～2.0；OD260/OD230≥2.0纯度不合格OD260/OD280<1.8或>2.0或OD260/OD230<2.04.2.2DNA总量要求DNA总量需大于或等于定制需求。4.3合成DNA完整性合成DNA完整性判断，采用5.2所规定的检测方法进行。根据

8、产品形式上的差异，需检测的合成DNA产品应分为两类，相关要求如下：——合成的DNA片段：要求电泳图中条带单一，无其他杂质污染；——包含有合成DNA产品的质粒：要求电泳图中应存在目