细菌感染的分子生物学检验ppt课件.ppt

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1、第九章细菌感染的分子生物学检验12原核生物---原核细胞（细菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体等）真核生物---真核细胞（多细胞动、植物及酵母等）非原核非真核生物---病毒、噬菌体生物种类2细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌、蓝绿藻,etc---最简单的细胞生物体生长快，易得到突变株；结构简单，但能进行复杂的代谢---分子生物学常用工具致病分子机制研究、感染性疾病的分子诊断、药物筛选、疫苗开发……原核生物（Prokaryote）341、基因组较小通常由一条双链环状DNA分子组成106~

2、107bp基因数较少只有一个DNA复制起点(ori)不同种类的原核基因组中GC含量差异很大，测定GC含量可推测细菌种类原核生物基因组452、具类核结构DNA与蛋白质结合，但不形成染色体结构（习惯上将之称为染色体）。染色体DNA在胞内盘曲、折叠形成一个致密区域，即类核（nucleoid）。无核膜将类核与胞浆分开原核生物基因组56外层：环状双链DNA分子中心：RNA分子和蛋白质673、具有操纵子结构原核生物的结构基因大多数按功能相关性成簇地串联排列在染色体上转录时，几个基因转录在一条mRNA链上，再分别

3、翻译成各自不同的蛋白质（多顺反子mRNA）原核生物基因组784、结构基因(structuregene)基因中编码RNA或蛋白质的DNA序列基因序列是连续的（无内含子）结构基因常为单拷贝（多顺反子）结构基因一般无重叠现象编码区在基因组中约占50%，比例远大于真核、小于病毒基因组原核生物基因组89105、具有编码同功酶的基因（isogene）表达产物的功能相同，但结构不完全相同6、含有可移动DNA序列包括插入序列、转座子、质粒等，能产生转座现象，使发生基因重组，改变生物体遗传性状原核生物基因组1011细

4、菌感染的分子生物学检验细菌感染的分子生物学检验策略结核分枝杆菌的分子生物学检验淋病奈瑟菌的分子生物学检验O157型大肠埃希菌的分子生物学检验医院细菌感染的分子生物学检验11细菌感染致病菌或条件致病菌入侵机体，并在机体中生长繁殖，产生毒素或其他代谢产物所引起的全身性感染临床表现：寒战，高热，关节痛，等烦躁，四肢厥冷，发绀，呼吸加速，血压下降，感染性休克，等12细菌感染传统检测方法：免疫学，微生物学，血液学镜检，分离培养，药敏试验，等分子生物学方法检测人体内感染细菌病原体特异性基因的存在、缺陷、表达异常

5、，对人体状况作出特异性诊断1314一、细菌感染的分子生物学检验细菌感染的一般性检测策略采用分子生物学方法，对感染病原菌固有的特异性核酸进行检测，判断有无细菌感染及感染细菌种类选取特异性保守序列方法：PCR，核酸杂交，芯片，等1415细菌感染的分子生物学检验细菌感染的完整性检测策略一般性检测：病原体有无及类型病原体进一步分型，耐药性检测15二、结核分枝杆菌的分子生物学检验结核分枝杆菌的基因组结构特征结核分枝杆菌的分子生物学检验内容分子生物学检验的临床意义16结核分枝杆菌Mycobacteriumtub

6、erculosis,TB.简称结核杆菌1882年，德国微生物学家RobertKoch首次证明，结核杆菌是引起结核病的病原菌侵犯人体个组织器官，以肺最多见近几年，有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势WHO报道，世界人口中1/3感染结核菌。每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病17结核分枝杆菌细长略弯曲的杆菌革兰氏阳性菌常用齐—尼染色法(Ziehl-Neelsentechnique）染色，结核杆菌呈红色，背景呈蓝色18TB的基因组结构特征1998年

7、，完成H37Rv的全基因组测序结核杆菌H37RvdsDNA,环状，约4412kb，4000个基因50个编码功能RNA的基因3924个ORF187个参与脂类代谢、细胞壁合成360个：细胞壁代谢66个：脂类代谢287个：能量代谢95个：氨基酸合成38个：细菌毒力相关69个：DNA合成19TB的分子生物学检验内容TB核酸检测PCRreal-timePCRPCR-RFLP：PCR+酶切线性探针杂交：PCR+杂交+显色链替代扩增技术扩增TB直接试验基因芯片GeneXpert全自动结核检测平台样本前处理，核酸提

8、取，PCR，结果分析20TB耐药的分子机制耐利福平DNA依赖RNA聚合酶β亚单位编码基因rpoB发生突变→酶结构改变→利福平不能与之结合耐异烟肼katG基因(编码H2O2酶-过氧化物酶)点突变、缺失、插入inhA基因(烯酰基还原酶)突变ahpC基因(烷基过氧化物酶还原酶）kasA基因(β2酮酰基酰基运载蛋白合成酶)21TB耐药的分子机制耐链霉素rrs基因(核糖体16SrRNA)、rpsL基因(核糖体蛋白S12)突变，降低药物结合到核糖体上的能力耐吡嗪酰胺pncA基因(