DB37T 4010-2020 含阿胶的食品中阿胶含量的测定方法.doc

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1、ICS 67.050X04     DB37山东省地方标准DB37/T4010—2020     含阿胶的食品中阿胶含量的测定方法MethodfordeterminationofEjiaocontentinEjiao-containingfood2020-07-09发布2020-08-09实施山东省市场监督管理局   发布DB37/T4010—2020前  言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由青岛海关提出、归口并组织实施

2、。本标准起草单位：青岛海关技术中心、东阿阿胶股份有限公司、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：张鸿伟、周祥山、张晓梅、段小波、张峰、郭尚伟、田守生、艾连峰、梁成珠、徐云鹏。本标准系首次发布。5DB37/T4010—2020含阿胶的食品中阿胶含量的测定方法1　范围本标准规定了含阿胶的食品中阿胶含量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于阿胶块、阿胶糕、阿胶粉中阿胶含量的测定。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版

3、本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法3　原理试样中的阿胶经三氯乙酸分离提取，胰蛋白酶酶解，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。4　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。4.1　阿胶　马科动物驴EquusasinusL.的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。[中华人民共和国药典2015版一部，第189页]5　试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。5.1　试剂5.1.1　乙腈：色谱纯。5.1.2　甲酸：色谱纯。5.1.3　碳酸氢

4、铵：优级纯。5.1.4　三氯乙酸：分析纯。5.1.5　丙酮：分析纯。5.1.6　胰蛋白酶：序列分析纯。5.2　溶液配制5DB37/T4010—20201.1.1　1 %碳酸氢氨溶液：称取碳酸氢铵（5.1.3）10.0 g，溶于水并稀释至1 000 mL。1.1.2　30 %三氯乙酸溶液：准确称取三氯乙酸（5.1.4）214.3 g，溶于水并稀释至500 mL。1.1.3　1 mg/mL胰蛋白酶溶液：称取1 mg胰蛋白酶（5.1.6），用1 %碳酸氢铵溶液1 mL溶解混匀，现用现配。1.1.4　0.1 %甲酸-水溶液：取甲

5、酸（5.1.2）1 mL，用水稀释至1 000 mL。1.1.5　0.1 %甲酸-乙腈溶液：取甲酸（5.1.2）1 mL，用乙腈（5.1.1）稀释至1 000 mL。1.2　标准品阿胶（对照药材）。1.3　标准储备溶液的配制准确称取阿胶对照药材（5.3）0.10 g，用1 %碳酸氢铵溶液（5.2.1）超声处理溶解，再用1 %碳酸氢铵溶液定容至稀释至50 mL，配制成浓度为2.0 mg/mL的阿胶标准储备溶液。-20 ℃以下避光保存，有效期3个月。1.4　材料滤膜：0.22 μm。2　仪器和设备2.1　液相色谱-质谱/质谱

6、分析仪：配有电喷雾离子源（ESI）。2.2　分析天平：感量为0.01 g和0.000 01 g。2.3　高速粉碎机。2.4　超声波仪。2.5　离心机。2.6　涡旋混合器。2.7　电热恒温水槽。3　试样制备与保存3.1　试样的制备取出代表性样品，固体样品冷冻后经粉碎机粉碎，用四分法缩分出不少于5.0 g试样，粉状样品均分成两份，每份不少于5.0 g，装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作试样，一份作留样。3.2　试样的保存按照样品产品标签规定的贮藏条件保存，未标明贮藏条件的，常温避光保存。4　试验步骤4.1　试样溶解4.1

7、.1　阿胶块、阿胶粉5DB37/T4010—2020准确称取0.1 g（精确到0.01 g）试样，用水超声溶解，再用水定容至25 mL。1.1.1　阿胶糕准确称取5.0 g（精确至0.01 g）试样，准确加入50 mL水，超声溶解，补足重量。1.2　提取精密移取2 mL样品溶液，缓缓加入等体积的30 %三氯乙酸溶液，充分振荡混匀，4 ℃静置20 min，7 000×g离心5 min，弃上清，用2 mL冰浴丙酮洗涤沉淀，7 000×g离心5 min后弃丙酮清液；再用2 mL冰浴丙酮重复洗涤一次，并挥干丙酮，加入1 %碳酸氢

8、铵溶液10 mL～20 mL超声至溶解，制得样品阿胶提取液。1.3　酶解样品阿胶提取液0.22 μm滤膜过滤，取400 μL滤液，加入40 μL胰蛋白酶溶液，混匀，37 ℃恒温酶解16 h，待测。1.4　标准工作曲线制备取标准储备溶液2 mL，按8.2制得阿胶提取液2 mL，过0.22 μm滤膜，分别取滤液50、10