薄层色谱鉴别介绍知识讲解.ppt

《薄层色谱鉴别介绍知识讲解.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、薄层色谱法概念薄层色谱法(TLC)将固定相(如硅胶)薄薄地均匀涂敷在底板(或棒)上，试样点在薄层一端，在展开罐内展开，由于各组分在薄层上的移动距离不同，形成互相分离的斑点，测定各斑点的位置及其密度就可以完成对试样的定性、定量分析的色谱法。在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物。比移值组分二组分一被分离混合物薄层色谱展开示意图薄层色谱法优点操作简单，定性结果直观缺点有一定毒性、定量

2、方面的精密度较差实验仪器⑴载板⑵固定相（吸附剂）或载体⑶涂布器⑷点样器⑸展开室实验操作实验操作1薄层板的制备吸附剂（硅胶）调制玻璃板涂布调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡。均匀涂布在玻璃板上，摇动摊平，晾干。使用前放入烘箱内，在105-115℃左右烘干40-50min。冷却后使用。粘合剂、添加剂固定相（吸附剂）的选择纤维素、淀粉硅酸镁硫酸钙硅胶佛罗里硅土氧化镁氧化铝活性炭对极性有机物的吸附作用增强2供试品的制备：按照各药品质量标准规定的方法进行提取分离。制得的供试品应放置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样量。3对照品溶液的制

3、备：可按质量标准规定精配成一定浓度的对照品溶液，置密塞小瓶中备用。标准药材对照溶液，一般需照供试品的制备方法制备。在使用对照品溶液时一定要注意将取样的毛细管充分洗干净，防止造成对照品污染。4点样：按规定吸取溶液用定量点样毛细管或色谱用微量注射器点样于薄层板上。点样基线距底边的距离为1～2cm，点间距一般为1.0-1.5cm。点样直径一般应小于5mm。两个以上的点样应在同一水平线上，并与薄层板的底边平行。点样时必须注意勿损伤薄层表面。点样示意图对照品样供试品样点样直径≤5mm1cm≤点间距≤1.5cm1-2cm自动点样器毛

4、细管点样5展开展开室展开剂（流动相）的选择：主要根据样品中各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解度等因素来考虑。展开剂的选择正己烷环己烷四氯化碳甲苯氯仿正丁醇乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇水溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强在一块薄层板上进行试验：若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极性过强；若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶剂的极性过弱。理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的Rf值相差尽可能大。各组分理想的比移值在0.2-0.8之间。当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用

5、混合溶剂作为展开剂。先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组合。1-2cm展开示意图展开剂要接触到薄层板下沿，但切勿接触到样点。盖上盖子，展开。观察展开情况。取出薄层板上升法倾斜上行法下降法展开方式示意图影响展开的因素A相对湿度的影响B溶剂系统的影响C溶剂蒸汽的影响D薄层板类型的影响E温度的影响F展距的影响A相对湿度的影响吸附剂的活度随相对湿度的增大而降低。20cm×20cm的硅胶薄层板在50%的相对湿度中：放置3分钟失去活性一半放

6、置15分钟吸附水分达最大值薄层在相对湿度为1-80%的情况下展开，Rf值可以相差3倍。最佳相对湿度范围决定于溶质和溶剂的极性，极性越大，相对湿度范围也相应增大。B溶剂系统的影响溶剂系统不同，组分的分配系数不同，故Rf值不同。在平面电泳中，溶液的离子强度增大，组分的泳动速度减小。预饱和分为2部分：1、展开缸的预饱和：在展开之前，使展开剂蒸汽在展开缸内饱和，使展开缸汽液状态达到一定的稳定状态，此时尚未放薄层板。2、薄层板的预饱和：在展开缸饱和后，放入已经点样完毕的薄层板，进行饱和，使薄层板整体差异性减小。具体做法是：在双槽

7、层析玻璃缸内,将其中一个槽内倒入配好的展开剂,另一个槽内放入薄层板,盖好上面的玻璃盖,这时候就是在预饱和。C溶剂蒸汽的影响关于饱和时间：根据展开剂而定。1、展开剂组分极性差异不大的且挥发性好的，时间可以短一些，一般15－20分钟即可；2、极性差异大的，且挥发性差异大的，时间要长一些，一般要30－60分钟；3、极性差异大的，且挥发性差异不大的，时间要长一些，一般要20－30分钟；4、极性差异不大，且挥发性差不大的，时间可以短一些，一般要10－15分钟；5、水饱和有机试剂或有机试剂饱和水的，时间一般都比较长，30－6

8、0分钟。6、另外，大家打开关闭展开缸的速度要快，放板取板的速度也要快，否则预饱和的效果全被你后期的操作给抹杀了！！D1滤纸纸色谱中所用的滤纸性质对分离效果有很大影响。对滤纸的要求是：物理性质均匀、质地均一、厚薄一致，否则斑点畸形，Rf值改变;2.具有一定的机械强度;3.纤维松紧程度适当;4.具有一定的纯度;5.纸面