微量细胞中和试验操作规程.doc

《微量细胞中和试验操作规程.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、微量细胞中和试验操作规程1目的确保微量细胞中和试验操作规范。2范围适用于微量细胞中和试验操作。3责任部门QC部相关检验人员4内容4.1材料及设备待检血清、对照血清、中和用病毒、无血清细胞培养液、细胞悬液、移液器及尖头、离心管、恒温水浴锅、5%培养箱、漩涡混合器、加样槽、96孔微量细胞板、净化工作台4.2操作程序（固定病毒稀释血清法）4.2.1灭活血清将待检血清56℃灭活30分钟4.2.2稀释血清取已灭活血清，在96孔微量细胞板上，用无血清细胞培养液稀释血清，从1:4开始作一系列倍比稀释，每孔含量50μL，每个稀释度2～4孔。4.2.3稀释病毒取-70℃冰箱保存的病毒液，按测定的

2、毒价作200TCID50稀释，（与等量血清混合后，其毒价为100TCID50）。4.2.4中和每孔加入50μL已稀释好的200TCID50病毒液，置5%培养箱37℃中和1h。4.2.5加细胞悬液血清与病毒中和1h后，取出细胞板，每孔加入50μL细胞悬液（24h长满单层为宜，一般每毫升100万～150万个细胞），置5%培养箱培养，72h判定。4.2.6对照设立2.6.1阴性和阳性血清对照各设2～4孔。阴阳性对照抗体滴度应成立。2.6.2病毒回归试验将200TCID50病毒液作0.1、1、10、100TCID50稀释，每个稀释度2～4孔，每孔50μL；补加50μL细胞悬液。0.1T

3、CID50不病变，100TCID50全病变，否则该实验不成立。2.6.3细胞对照设立2～4孔无病毒和血清的正常细胞对照，该对照细胞应保持良好的形态和特征。4.3结果判定和计算当病毒回归试验、阳性、阴性、细胞对照全部成立时，才能进行判定。被检血清孔出现100%CPE判阴性，50%以上细胞出现保护者为阳性；用Karber法计算结果。4.4清场4.4.1在以上各工序操作技术后，将生物安全柜或超净工作台内所有器具取出。4.4.2用0.1%的新洁尔灭溶液擦拭消毒。4.4.3将使用过的物品放入带消毒桶内，所有废弃物品放入垃圾桶内。4.4.4在进行生物安全柜或超净工作台内环境杀菌消毒。4.4

4、.5将所有物品归类摆放，擦拭桌面、地面。4.4.6检查并填写当天所有记录。打开无菌室紫外灯进行室内消毒。