免疫室SOP文件全资料.doc

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1、丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法）1、原理：本法采用间接法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被基因重组HCV结构和非结构区，配以酶标记IgG抗体及TMB显色等其他试剂，检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒抗体。2、标本采集与处理׃2.1受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐５分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过１分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁

2、净的塑料管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血液标本应尽快地送实验室。本试剂使用样品为人血清或血浆，含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：样品中应无微生物，可在2-8oc储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。3、试剂与仪器：׃3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：万泰生物药业股份3.1.2批准文号：国药准字S200100143.1.3包装：96T×

3、13.1.3试剂配置：浓缩洗涤液50ml×1瓶样品稀释液12ml×1瓶HCV酶标板8×12孔或12×8孔HCV酶标试剂12ml×1瓶HCV阳性对照0.2ml×1支HCV阴性对照0.2ml×1支底物液A、B液各6ml×1瓶终止液6ml×1瓶自封袋1个封版膜2说明书1份3．2测定仪器：3.2.1酶标仪：安泰modelMT-8583.2.2洗板机：ANALYTECH8284、操作步骤：4．1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。4．2编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标

4、试剂）其余各孔加入100UL样本稀释液。4．3加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照10微升，轻轻振荡混匀。4．4温育：用封版膜封版后，置37oc温育60分钟。4．5洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。4．6加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。4．7温育：置37oc温育30分钟。4．8洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干4．9显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色30分钟。4．10终止：每孔加终止液1滴（50微升），轻轻振荡混匀

5、。4．11测定：10分钟测定结果，设定酶标仪单波长450nm或双波长450nm/600-650nm测定。用空白孔调零点后测定各孔A值。5：结果判断5．1目测：在白色背景下观察各孔显况，有明显黄色者为丙型肝炎病毒抗体（抗HCV）阳性；无色者为丙型肝炎病毒抗体（抗HCV）阴性。5．2酶标仪检测：5．2．1临界值（CUT/OFF）计算：CUT/OFF=阴性对照孔A均值+0.12。（不足0.02按0.02计算）5．2．2阳性判定：样品A值≥临界值（CUTOFF）者判为抗HCV阳性。(注意初试阳性应重新取样双孔复试)5．2．3阴性判定：样品A值<临界值（CU

6、TOFF）者判为抗HCV阴性。6：注意事项：6．1本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进行。封版膜不能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂和阴阳对照不可混用，不能与其他厂家试剂混用。6．2避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如84消毒液）的环境下操作。6．3使用前请将试剂平衡至室温（平衡30分钟以上）实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2-8oc.未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2-8oc保存。过期试剂请勿使用。6．4加样时必须使用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组分时，用更换加样器吸头和加样槽，以防出现交叉污染

7、。6．5洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定30-60秒浸泡时间。再洗板结束后，必须立即进行下一步，不可使酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。6．6结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。6．7所有样品、废液和废弃物都应按传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意安全。6．8显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。6．9由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HCV感染的可能。检测

8、的阳性结果必须结合临床信息进行分析。7：临床意义：检测人血清或血浆中的HCV抗体。适用于血液的筛查及临床丙型肝炎病毒感染的