糖尿病自身抗体.doc

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1、糖尿病自身抗体联检试剂盒（玻片法）说明书【产品名称】通用名：糖尿病自身抗体联检试剂盒（玻片法）【包装规格】20T/盒【预期用途】本试剂盒用于定性同时检测人血清/血浆中存在的IAA、ICA和GAD抗体。对I型糖尿病的诊断和胰岛素治疗效果监测有重要的参考价值。抗胰岛素抗体（IAA）存在于用胰岛素治疗的糠尿病患者的血清中。主要为IgG，少数接受胰岛素治疗者可查到IgM，IgA，IgD及IgE，其中IgE主要出现在对胰岛素过敏反应的患者。Ins-Ab的产生与胰岛素制剂的免疫原性有关，亦与受药者各体“体质性”不

2、同有关。接受胰岛素治疗后，Ins-Ab一般在3~6个月出现，9~12个月达高峰，以后变化不大。如停止用药，则3~9个月内抗体可消退，停药后再使用胰岛素，抗体迅速出现并可上升到比以前更高的水平。因用药6个月以后始检出抗体者少见，Ins-Ab的大量产生可导致患者对胰岛素不敏感。因此，Ins-Ab的测定为改进糖尿病治疗方案提供重要依据，也是评价药用胰岛素的质量（免疫原性和纯度）的一种可靠指标。抗胰岛细胞抗体（ICA）或称抗胰岛细胞胞浆抗体存在于1型糖尿病患者血清中，为一免疫球蛋白，属IgG，对所有胰岛内分泌

3、细胞的胞浆成分都起作用，与胰岛β细胞起反应而产生细胞毒效应。新近发现的1型糖尿病患者，ICA阳性率可达70%~90%而非糖尿病群体中仅0.1%~0.5%存在ICA。1型糖尿病一级亲属中5%ICA阳性，这些个体构成了患1型糖尿病的高危人群。许多研究表明，血清中有ICA和Ins-Ab的存在是评价患1型糖尿病可能性的一个指标。因此ICA的血清学检测是早期诊断1型糖尿病强有力的工具。抗谷氨酸脱羧酶抗体（GAD）为1型糖尿病患者血中存在又一自身抗体。人类新发病的1型糖尿病患者中，70%左右可检测到GAD-Ab。

4、谷氨酸脱羧酶是抑制性神经递质γ-氨基丁酸的生物合成酶，有GAD65和GAD67两种形式由同一基因产生，具有高度同源性。存在于脑和胰岛细胞中。1型糖尿病患者血清中的GAD-Ab绝大部分为GAD65抗体。针对胰岛GAD的反应最早出现在疾病临床发病前几年甚至十几年，故在临床前期（无症状）早而准确地预报疾病的发生将有助于干预胰岛细胞破坏，最大限度地保护胰岛细胞的体积。ICA和GAD-Ab是目前诊断成人迟发性自身免疫性糖尿病的两个重要指标。且GAD-Ab优于ICA。【检验原理】本试剂盒应用蛋白质化学技术将高度纯

5、化的胰岛素基因工程抗原、胰岛细胞基质抗原和基因工程GAD抗原按特定图案设计，固定于活化后的玻璃基质上作为载体，加入患者血清后，血清中的抗体与片基上的抗原结合，再加入示踪物，在底物的作用下形成按点样设计的图形，一次实验即可检测出三种糖尿病患者自身抗体的血清状况，具有省时、高效、高通量平行检测的优点。是现代免疫学技术和蛋白质化学技术的结晶。检测结果既可肉眼定性观察，也可配置阅读仪半定量检测，结果可长期保存，是传统检测方法无可比拟的。【主要组成成份】1)玻璃基片（已点样有胰岛素抗原、胰岛细胞抗原和GAD抗原

6、及质控点兔IgG。不同批号间不能互换）20X1T片2)标本稀释液（磷酸缓冲液为主，含BSA、0.1%NaN3，不同批号可互换）1瓶（10ml）3)示踪物（酶标记SPA，含蛋白稳定剂、0.02%硫柳汞，不同批号间不能互换）1瓶（3ml）4)显色剂（四甲基联苯胺、醋酸缓冲液，不同批号可互换）1瓶（3ml）5)洗涤液(磷酸缓冲液为主,含TW-20、0.1%NaN3，不同批号间可互换)2瓶（15mlX3，直接使用）6)说明书（不同批号间可通用）1份7)湿盒自备：于饭盒内放湿纱布两层即可。【贮存条件及有效期】2

7、-8℃密封保存，避免冻结。有效期10个月。【适用仪器】本公司阅读仪及各类灰度扫描仪。【样本要求】①尽量用新鲜标本，如需保存，可于2-8℃冷藏48小时或-20℃冻存4周（样本应避光）。避免反复冻溶（3次以上）。①避免用溶血、混浊或脂血标本。②样本若需运输，应保持2-8℃或冻存状态。③标本中避免加入抗凝剂或保护剂或防腐剂，以免影响试验结果。【检验方法】1)将试剂盒平衡至室温。标本稀释：用标本稀释液1∶21（即15ul血清标本加于300ul稀释液中）稀释血清标本于试管中混匀。2)加样：取出玻璃基片拆封并平放

8、于实验台上，于每方格中加入300ul已稀释的标本，注意使标本布满方格。3)孵育：将玻片置于湿盒中并放置37℃温育30分钟，甩去方格内液体，于每格内加入6滴洗涤液，停顿1秒钟后甩掉洗液。连续洗涤3次，最后用蒸馏水流洗1秒钟，甩干后在吸水纸上吸干方格周围水滴。4)加示踪物：每格滴2滴示踪物，勿溢出方格外。湿盒中37℃温育30分钟，同上法洗涤3次，在吸水纸上吸干周围水滴。5)显色：每格加入2滴显色剂，37℃孵育箱显色10-12分钟。甩去方格内液体，用蒸馏水流洗