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1、第18卷第4期杭州师范学院学报(自然科学版)Vol.18No.42001年8月JournalofHangzhouTeachersCollege(NaturalScience)Aug.2001文章编号:1008-9403(2001)04-0038-03丁酸梭菌培养条件的研究施曼玲,戴,章玲(杭州师范学院生命科学学院,浙江杭州310012)摘要:采用多种培养基及培养技术,研究丁酸梭菌的生长情况,寻找最适培养基和培养方法.实验结果表明:丁酸梭菌为厌氧菌,在较低的氧化还原电位下生长良好,运用封石蜡凡士林法和焦性没食子酸法厌氧培养长势都很好.在牛
2、肉膏蛋白胨培养基和基本培养基上不生长,在疱肉培养基、改良疱肉培养基、改良牛肉膏蛋白胨培养基、完全培养基和磷酸缓冲液培养基上均能生长,其中磷酸缓冲液培养基为最佳培养基.关键词:丁酸梭菌;培养基;微生态制剂中图分类号:Q93文献标识码:A微生态制剂(microecologics)又称微生态调节剂(microecologicalmodulator),是一种利用宿主的正常菌群来调整宿主微生态平衡的微生物制剂.正常菌群的存在是维持机体生命活力,保证机体健康不可缺少的条件,当内外各种因素引起宿主机体微生态平衡失调时,机体正常的生理功能就会发生紊乱,
3、出现疾病.近年随着微生态学这门年轻学科的发展,许多具有保持和恢复人和动物肠道微生态平衡的“天然生长促进剂”——微生态制剂已相继问世,这些制剂大多数是从人体和哺乳动物肠道及土壤中分离到,主要是乳酸[1-4]菌和双歧杆菌,在国内市场已有成品出现,其作用机理也比较清楚.丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)[5]在日本作为微生态制剂已研制成功,国内也已有临床报导证实丁酸梭菌具有治疗小儿腹泻的作用,目前国内临床使用主要依赖进口.本研究试图探索丁酸梭菌的培养条件,选择最佳的培养基和培养方法,为研制和开发丁酸梭菌微生态制剂提供基础数据
4、,并作一些初步的准备.1材料1.1菌株来源丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)由日本米雅利桑株式会社提供.1.2培养基牛肉膏蛋白胨液体培养基,改良牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,改良牛肉膏蛋白胨液体培养基,疱肉培养基,改良疱肉培养基,基本培养基,完全培养基,磷酸缓冲液培养基.2方法2.1培养基的配制[6]牛肉膏蛋白胨液体培养基、基本培养基和完全培养基均按常规方法配制.改良牛肉膏蛋白胨液体培养基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,葡萄糖5g,蒸馏水1000ml,PH7.0～7.2.改良牛肉膏蛋白胨琼收稿日期:2001-05-
5、30作者简介:施曼玲(1969-),女,福建福鼎人,杭州师范学院生命科学院讲师,硕士,主要从事微生物学研究.第4期施曼玲,等:丁酸梭菌培养条件的研究39脂培养基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,葡萄糖5g,琼脂17.5g,蒸馏水1000ml,PH7.0～7.2.疱[7]肉培养基按常规方法配制.改良疱肉培养基按常规方法配制,灭菌后去除肉渣.磷酸缓冲液培养基,按彭[8]玉麟等方法配制.2.2对氧的敏感性将丁酸梭菌接种于改良牛肉蛋白胨琼脂培养基的试管斜面上,34℃有氧培养48h,另无菌操作封上适量的石蜡凡士林(1∶1),34℃厌氧培养
6、48h,观察生长情况.2.3厌氧培养方法的选择[9]采用封石蜡凡士林法和焦性没食子酸法培养丁酸梭菌.2.4培养基的选择将丁酸梭菌分别接种于基本培养基,牛肉膏蛋白胨液体培养基,改良牛肉膏蛋白胨液体培养基,完全培养基,磷酸缓冲液培养基,疱肉培养基,改良疱肉培养基的小试管中,焦性没食子酸法培养,34℃培养48h,观察生长情况.将丁酸梭菌1ml接种于各含改良牛肉膏蛋白胨液体培养基、完全培养基、磷酸缓冲液培养基2ml的小试管中,并分别设对照.在分装灭菌前,培养基先过滤.用焦性没食子酸法34℃培养48h,每隔2h各取出2支接种小试管,用比浊法测定光
7、密度值,绘出生长曲线.3结果及分析3.1对氧的敏感性丁酸梭菌在未封凡士林石蜡的改良牛肉膏蛋白胨琼脂培养基即有氧环境中不生长,而在封凡士林石蜡的改良牛肉膏蛋白胨琼脂培养基即无氧环境中却生长很好.可见丁酸梭菌对氧敏感,是严格厌氧菌.3.2厌氧培养方法封石蜡凡士林法,疱肉培养基混浊度增加,菌体大量沉积于试管底部,石蜡凡士林封环被提升,可知有气体产生.焦性没食子酸法,改良牛肉膏蛋白胨液体培养基混浊度增加,菌体大量沉积于试管底部.可见,丁酸梭菌在两种厌氧培养中都长势良好.在封石蜡凡士林法中,石蜡凡士林很快地隔绝了空气,在培养基内造成欠氧环境;而焦
8、性没食子酸法,焦性没食子酸与氢氧化钠混合后,能立即吸收氧气,造成厌氧环境,这两种厌氧培养方法都有利于丁酸梭菌的生长.3.3培养基的选择丁酸梭菌在各培养基上的生长情况如下:在基本培养基和牛肉膏蛋白胨液体培养基
