鸡传染性贫血病LAMP检测方法的建立.pdf

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1、山东畜牧兽医2013年第34卷鸡传染性贫血病LAMP检测方法的建立吴焕荣赵全兴杨欣欣杨慧玲国琳(山东众成饲料科技有限公司山东省禽用饲料工程技术研究中心山东肥城271600)潘志刚(山东省烟台市莱山区动物卫生监督所)摘要本文借助环介导等温扩增技术，建立了鸡传染性贫血病的快速检测方法．通过提取DNA模板，设计特异性LAMP~I物，成功扩增出梯形条带。结果表明，LAMP能检测出最低DNA量约为0．245pg／gl，而PcR能检测出最低DNA量约为2．45pg／btl；且具有特异性，对其他相关鸡病病原检测结果均为阴性。用建立的LAMP方法对l临床

2、样品进行检测，同时与PCR方法比较，结果表明LAMP检测的阳性率要~I',PCR高。LAMP检测方法无需昂贵设备，适用于鸡场的临床快速诊断。关键词鸡传染性贫血病毒环介导等温扩增技术PCR检测中图分类号：S858．31文献标识码：A文章编号：1007—1733(2013)10-0018-03鸡传染性贫血病(ChickenInfectiousAnemia，cta)是四种特异引物和一‘种具有链置换活性的DNA聚合酶，在由鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectiousanemiavirus，恒温条件下高效扩增核酸，具有高特异性、快速灵敏、C

3、IAV)~I起雏鸡的以再生障碍性贫血和全身性淋巴组织萎高效、操作简便等特点。LAMP方法是一种新型的DNA环缩为特征的一种免疫抑制性疾病，经常合并、继发和加介导等温扩增反应，不需要特殊的仪器设备，只需要用重病毒、细菌和真菌性感染，危害很大[t,21。国内外的病普通的水浴锅就可以完成整个诊断过程，而PCR反应程序原分离和血清学调查结果表明，鸡传染性贫血病可能呈比较复杂，反应时间较LAMP反应时问长，而且LAMP检世界性分布，由鸡传染性贫血病毒诱发的疾病已成为一测的灵敏度远高于PCR，本文研究利用LAMP技术诊断这个严重的经济问题，特别是对肉

4、鸡的生产口．4】。种疾病。目前针对该病的诊断方法有ELISA、DNA探针、常1试验材料规PCR、实时PCR等，这些诊断方法对实验条件要求比较1．1材料CIAV标准毒CuX．1株(M55918)由公司实验室高，而且对操作者要求具有很好的专业背景，环介导等保存，ALV毒株由山东农业大学赠予。pTCIAVI~I]性克温扩增技术(Loop—MediatedIsothermalAmplification，隆、ALv阳性克隆均由公司实验窜保存。LAMP)是由日本Notomi等在2000年开发的一种新颖的恒1．2主要试剂和仪器BstDNA聚合酶，大片段

5、(New温核酸扩增方法【，其特点是针对靶基的6个区域设计EnglandBiolabs)；普通DNA产物纯化试剂盒：PstI限制基金项目：山东省科技发展计划(201IGNCI1l13)；泰安市科技发展计划专项计划(20113061)·通讯作者鸡生产性能的应用效果详见表2。牛菌有协同作用的寡聚糖、生长因子、植物提取物等成表2微生态制剂对肉鸡生产性能的应用效果分组成的微生态制剂，可以有效抑制有害菌、调节肠道菌群、保持肠道茼群的平衡，增强鸡只的机体免疫机力，有效减少肉鸡发病率和死亡率，促进肉鸡生长与提高饲料利用效率，值得在养殖业中推广应用。参考文

6、献【1】易力，倪学勤，潘康成等．不同微生态制剂对肉仔鸡生产性能的影响【J】．兽药与饲料添加剂，2004(5)：18·19．[2】赵风立，苏志强等．微生态制剂在肉鸡Il·应用研究[J】．兽医导刊，2012(12)：70·71．注：数据右上角标示不同小写字母表示差异显著(P<0．05)。[3】荆忠良，张海峰，王振平等．微生态制剂的研究进胜及其在畜牧生3结论产巾的应用【J】l山东畜牧兽医，2007(3)：50—51．木试验主要选用【1{包埋枯草芽孢杆茼、产朊假丝酵(收稿日期：20l3_o7-JD1)母茵、包埋嗜酸乳杆菌、双歧杆菌等多种益生菌及与

7、益l8