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1、湖南师范大学学报(医学版)2007,4(2)58JHunanNormalUniv(MedSci)Ξ结核病实验室快速诊断方法的研究谭笑(湖南省结核病医院,湖南长沙410006)[摘要]目的:应用BACTECTB960快速培养法、ELISA、荧光定量PCR法检测痰标本中结核分枝杆菌,评价三种方法在结核病实验室快速诊断方法中的作用和地位。方法:对735例临床确诊的结核病患者和100例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用荧光定量PCR法和BACTECTB960快速培养法检测,并分离患者外周血血清检测结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果:BACTECTB9
2、60快速培养法检测结核杆菌阳性率为30%,特异性为100%;血清结核抗体检测阳性率为55%特异性为75%;荧光定量PCR检测阳性率为48.6%,特异性为100%。结论:荧光定量PCR是一种快速、防污染、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。[关键词]结核分枝杆菌;实验诊断;快速培养;结核抗体;荧光定量PCR+[中图分类号]R378.911[文献标识码]A[文章编号]16732016x(2007)0220058202结核病(tuberculosis,TB)主要是由结核分支杆菌例。感染引起的疾病,全球现有结核病人2000万人,每
3、1.2方法年约有900万新增患者,而且有300万人死于这种1.2.1BACTEC2TB960快速培养仪及所需试剂为疾病,是单一病因死亡最多的传染病。根据最近一美国BD公司产品,取收集于当天液化处理后的痰次卫生部组织的结核病流行病学抽样调查结果显标本0.5mL,参照仪器操作手册进行检测。示:日前我国有4亿人感染过结核杆菌,现有的传染1.2.2用温州伊利康生物技术有限公司产的结核性结核病人达到200万人。结核病人数居世界第2抗体IgG快速测定试剂盒。实验对象均空腹采静脉位。血2mL,分离血清。按试剂盒内说明书操作。用长期以来,结核病的实验室诊断方法主要依赖:B
4、io2TekELX808酶标仪在450nm波长处进行比色。涂片抗酸染色镜检、结核菌培养法。结核菌培养法当测定孔OD值Π临界孔OD值≥1时为阳性。是病原体检测的“金标准”,精确可靠,特异性高,可1.2.3BI2RADiCycler荧光定量PCR检测仪。结核同时做药敏试验和菌群鉴定。但所需时间长,一般杆菌荧光定量PCR诊断试剂盒购于深圳市匹基生为4～8周,且对早期感染者不易检出,失去了早发物工程股份有限公司。在痰标本中加入等体积的现早治疗的良机,严重的影响了结核病的及时诊断。lmolΠLNaOH溶液混匀,37℃恒温处理30min,使其[1]因此.结核的快速、准
5、确诊断尤为重要。充分液化,提取标本DNA。40μL反应体系中加入本实验应用BACTECTB960快速培养法、36.8μLTBDNAPCR反应液、1μL荧光探针、0.2μLELISA、荧光定量PCR检测临床标本中的结核分枝Taq酶、2μL模板。于BIO—RADiCycler荧光定量杆菌,并做出比较分析,报告如下:PCR检测仪上扩增检测。PCR参数设置如下:37℃,5min;94℃,1min;95℃,5sec;60℃,30sec。38个循1材料与方法环。结果以阴、阳性表示,检测样本CT值≤37.0者1.1标本来源为阳性,等于0.0者为阴性。838例患者痰标本和
6、血液标本均来自湖南省结1.3数据处理核病医院2006年3月～2006年7月临床确诊的肺采用SPSS10.0统计软件包进行统计处理,选2结核病患者738例,非结核呼吸系统疾病患者100用χ检验。Ξ收稿日期:2007204220作者简介:谭笑(19662),女,湖南湘潭人,检验师,主要从事临床检验工作。Email:tangxiao@126.com©结核病实验室快速诊断方法的研究谭笑59结核抗体检测法阳性率明显高于荧光定量PCR检2结果测法;荧光定量PCR检测法阳性率明显高于用3种方法检测对738例结核病患者及100例BACTECTB960快速培养法。100例非
7、结核呼吸系非结核呼吸系统疾病患者临床标本的结果见表1。2统疾病患者的检测结果经χ检验,结核抗体检测法2结果显示,738例结核病患者的检测结果经χ检验,特异性明显低于荧光定量PCR检测法。表13种方法检测对738例结核病患者及100例非结核呼吸系统疾病患者临床标本的结果结核组非结核呼吸系统疾病组P阳性阴性总计阳性率(%)阳性阴性总计阳性率(%)BACTECTB960快速培养法22851073830.80100100100ELISA41032873855.5257510075P<0.01荧光定量PCR35838073848.60100100100飞跃,而且与常
8、规PCR相比,特异性更强,有效解决3讨论了PCR后污染问题,可进行
