HCV-RNA 检测的质量控制分析-论文.pdf

《HCV-RNA 检测的质量控制分析-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、国际检验医学杂志2014年9月第35卷第l7期TntJLabM耐，September2014，Vo1．35，No．17·检验科与实验室管理·HCV—RNA检测的质量控制分析宋丽(徐州市传染病医院检验科，江苏徐州221000)文献标识码：B文章编号：1673—4130(2014)17—2420—02据世界卫生组织统计，全球丙型肝炎病毒(HcV)的感染过程中要勤换手套，疑为污染，立刻更换手套。HCV—RNA的率约为3，约1．7亿人感染了HCV，每年新发丙型肝炎病例提取最好在冰上操作，操作过程中注意吸头不要碰到管底沉淀约3l

2、5万例，而丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)的检测是判物，吸取血清或血浆时注意不要吸到红细胞。逆转录成cDNA断丙肝病毒感染的直接证据。HCV—RNA的实验室检测操作后，最好进行下一-步实验，否则要转移上清液至灭菌离心管中，过程繁琐，影响因素较多。HCV-RNA检测质量的好坏，将直保存于～2O℃待用。接影响到疾病的诊断和疗效观察，因此，从事该项检测的实验2．2防止气溶胶的污染实验过程『fI为r防【卜气溶胶的污室要建立一个良好的实验室实践准则(goodlaboratoryprac—染，必须使用经高压灭菌且带滤芯的吸头，操

3、作时做阴性对照，flee，GIP)，把实验室误差降到最低以便更好地服务于临床。阳性对照，宅白对照，I床标本同步处理既可验证PCR反应GLP强调从样品收集到报告发出后解释的全过程质量管理，的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性。包括实验条件、检测方法以及人员的管理和控制。从事该项检2．3实验室温度的影响实验摩温度应保持在2O～25℃，测测的机构必须建立一个合理规范的实验室，该实验室必须通过定中温度波动范围不大于0．5℃，否则就会影响实验结果的可国家卫生部或省级生厅验收合格，实验室管理应严格按照靠性。PCR基因扩增实验室

4、的管理规范，严格分为4个区：(1)试剂2．4严格遵守操作规程操作人员必须是经过专l培训人准备区，(2)标本处理区，(3)模板加入区(扩增区)，(4)扩增产员，持有基因诊断上岗证的专业主管，并且具有一定的丁作物分析区。笔者就所从事的HCV-RNA检测细节人手，分析经验。该检测方法再质量控制时的一些注意事项。3实验后质量控制1实验前质量控制3．1实验结果的判定本组所用仪器为厦rJ安普利生物有限1．1标本的采集、储存与运送抽取患者空腹血液2～3mI公司GeneIight9800荧光定量扩增仪，试剂为广州达安试剂。于含有EDT

5、A或枸橼酸盐的抗凝管内，充分混匀。HCV—RNA如果增长曲线不呈S型曲线或Ct值为李白，则判断样品的检测受饮食影响，HCV易与血中脂质及脂蛋白结合，使检出率HCV—RNA浓度小于检测极限。若增长曲线呈s型曲线且下降。HCV-RNA的PCR包括RNA到DNA的转录，第一次值小于3O，则按以下方法判断：若样品的榆测值小于1．0×10PCR及第二次PCR，其中任何步骤的问题均影响其检出[2。。copies／mI，则判样品HCV—RNA总浓度即为榆测值，若样品标本采集后应放在无菌带有盖子的容器中立即送检，因此标本的检测值大于1

6、．0×10。copies／mI，则样品HCV-RNA总浓度的规范化采集是结果准确性的保证。大于1．0×10copies／mL。如果需要精确定量结果，可将提取1．2抗凝剂的使用最好用含有EDTA或枸橼酸盐的抗凝后的样品稀释至线性范围内再检测。管，不能使用肝素抗凝管，因为肝素是Taq酶的强抑制剂，且3．2实验结果核对实验结束后，工作人员要认真核查实验在核酸提取过程中难以去除，容易导致结果出现假阴性。如果结果，结合患者的临床资料对结果进行分析并发出实验报告。用真空分离胶管，标本要放置足够时间，待纤维蛋白全部析出3．3废弃物的

7、处理使用过的离心管、吸头须嚣于1o的次才能离心，因为纤维蛋白影响核酸的提取。氯酸钠溶液中浸泡，消毒后方可丢弃。实验完毕后，用10的1．3标本放置时间的影响采血后尽快分离血，因为HCV-次氯酸钠或75酒精擦拭工作台和移液器，打开紫外灯照RNA放置时间过长，会出现病毒的降解，导致结果假阴性]。射2h。标本要长时间保存，应保存于一7o℃，并且要避免反复冻融。4小结1_4试剂的选择试剂质量问题是关系到PCR实验的成功HCV是导致慢性肝炎、肝硬化和月十细胞癌的主要原之一与否，试剂的质量至关重要，试剂的质量问题涉及多个方面，如。大

8、约有超过75的HCV感染者发展为慢性感染，HCV细胞的裂解、模板的抽提、引物位点的选择、Taq酶的活性等慢性感染和终末期肝病、肝细胞癌变密切相关。尽早诊断等。试剂使用前要完全解冻，少量分装，用多少拿多少，避免反和治疗可望终止或延缓病变发展，从而改善患者预后，所以其复冻融。实验室的检测必不可少。然而影响PCR扩增效率的因素很2实验中