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《HCV-RNA 检测的质量控制分析-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、国际检验医学杂志2014年9月第35卷第l7期TntJLabM耐,September2014,Vo1.35,No.17·检验科与实验室管理·HCV—RNA检测的质量控制分析宋丽(徐州市传染病医院检验科,江苏徐州221000)文献标识码:B文章编号:1673—4130(2014)17—2420—02据世界卫生组织统计,全球丙型肝炎病毒(HcV)的感染过程中要勤换手套,疑为污染,立刻更换手套。HCV—RNA的率约为3,约1.7亿人感染了HCV,每年新发丙型肝炎病例提取最好在冰上操作,操作过程中注意吸头不要碰到管底沉淀约3l
2、5万例,而丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)的检测是判物,吸取血清或血浆时注意不要吸到红细胞。逆转录成cDNA断丙肝病毒感染的直接证据。HCV—RNA的实验室检测操作后,最好进行下一-步实验,否则要转移上清液至灭菌离心管中,过程繁琐,影响因素较多。HCV-RNA检测质量的好坏,将直保存于~2O℃待用。接影响到疾病的诊断和疗效观察,因此,从事该项检测的实验2.2防止气溶胶的污染实验过程『fI为r防【卜气溶胶的污室要建立一个良好的实验室实践准则(goodlaboratoryprac—染,必须使用经高压灭菌且带滤芯的吸头,操
3、作时做阴性对照,flee,GIP),把实验室误差降到最低以便更好地服务于临床。阳性对照,宅白对照,I床标本同步处理既可验证PCR反应GLP强调从样品收集到报告发出后解释的全过程质量管理,的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性。包括实验条件、检测方法以及人员的管理和控制。从事该项检2.3实验室温度的影响实验摩温度应保持在2O~25℃,测测的机构必须建立一个合理规范的实验室,该实验室必须通过定中温度波动范围不大于0.5℃,否则就会影响实验结果的可国家卫生部或省级生厅验收合格,实验室管理应严格按照靠性。PCR基因扩增实验室
4、的管理规范,严格分为4个区:(1)试剂2.4严格遵守操作规程操作人员必须是经过专l培训人准备区,(2)标本处理区,(3)模板加入区(扩增区),(4)扩增产员,持有基因诊断上岗证的专业主管,并且具有一定的丁作物分析区。笔者就所从事的HCV-RNA检测细节人手,分析经验。该检测方法再质量控制时的一些注意事项。3实验后质量控制1实验前质量控制3.1实验结果的判定本组所用仪器为厦rJ安普利生物有限1.1标本的采集、储存与运送抽取患者空腹血液2~3mI公司GeneIight9800荧光定量扩增仪,试剂为广州达安试剂。于含有EDT
5、A或枸橼酸盐的抗凝管内,充分混匀。HCV—RNA如果增长曲线不呈S型曲线或Ct值为李白,则判断样品的检测受饮食影响,HCV易与血中脂质及脂蛋白结合,使检出率HCV—RNA浓度小于检测极限。若增长曲线呈s型曲线且下降。HCV-RNA的PCR包括RNA到DNA的转录,第一次值小于3O,则按以下方法判断:若样品的榆测值小于1.0×10PCR及第二次PCR,其中任何步骤的问题均影响其检出[2。。copies/mI,则判样品HCV—RNA总浓度即为榆测值,若样品标本采集后应放在无菌带有盖子的容器中立即送检,因此标本的检测值大于1
6、.0×10。copies/mI,则样品HCV-RNA总浓度的规范化采集是结果准确性的保证。大于1.0×10copies/mL。如果需要精确定量结果,可将提取1.2抗凝剂的使用最好用含有EDTA或枸橼酸盐的抗凝后的样品稀释至线性范围内再检测。管,不能使用肝素抗凝管,因为肝素是Taq酶的强抑制剂,且3.2实验结果核对实验结束后,工作人员要认真核查实验在核酸提取过程中难以去除,容易导致结果出现假阴性。如果结果,结合患者的临床资料对结果进行分析并发出实验报告。用真空分离胶管,标本要放置足够时间,待纤维蛋白全部析出3.3废弃物的
7、处理使用过的离心管、吸头须嚣于1o的次才能离心,因为纤维蛋白影响核酸的提取。氯酸钠溶液中浸泡,消毒后方可丢弃。实验完毕后,用10的1.3标本放置时间的影响采血后尽快分离血,因为HCV-次氯酸钠或75酒精擦拭工作台和移液器,打开紫外灯照RNA放置时间过长,会出现病毒的降解,导致结果假阴性]。射2h。标本要长时间保存,应保存于一7o℃,并且要避免反复冻融。4小结1_4试剂的选择试剂质量问题是关系到PCR实验的成功HCV是导致慢性肝炎、肝硬化和月十细胞癌的主要原之一与否,试剂的质量至关重要,试剂的质量问题涉及多个方面,如。大
8、约有超过75的HCV感染者发展为慢性感染,HCV细胞的裂解、模板的抽提、引物位点的选择、Taq酶的活性等慢性感染和终末期肝病、肝细胞癌变密切相关。尽早诊断等。试剂使用前要完全解冻,少量分装,用多少拿多少,避免反和治疗可望终止或延缓病变发展,从而改善患者预后,所以其复冻融。实验室的检测必不可少。然而影响PCR扩增效率的因素很2实验中
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