四逆散对HepG2移植性肝癌裸鼠Sirt1和p53表达的影响-论文.pdf

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1、16中药药理与临床2014；30(3)是临床常用的中药之一。很多经典名方中都有栀子的配伍使的相互作用，及栀子的临床安全使用剂量。用，如《伤寒论》中的栀子厚朴汤、茵陈蒿汤、栀子豉汤，《金匮要略》中的栀子大黄汤等。2010年版《中国药典》规定栀子的临床参考文献用量为6—10g，但临床上有些医生在临证处方时为提高疗效喜欢加大剂量使用，这可能会带来较大的安全性风险。有文献认1杨洪军，付梅红，吴子伦，等．栀子对大鼠肝毒性的实验研究．中国中为若服用栀子30g甚至更高的剂量，就可能会导致肝脏损伤。药杂志，2006；31(13)：1091—10932王波，杨洪军，高双荣，等．栀子对大鼠肝肾毒性的病理学观察

2、．中国在本研究中，SD大鼠经口灌胃给予栀子厚朴汤1个月，无毒性实验方剂学杂志，2007；13(5)：45—48作用剂量(NOAEL)低于8．5g生药／kg，这个剂量按体表面积换3齐娜，蒋致诚，苏忆兰，等．栀子水提物对大鼠毒性作用的探讨．食品算出人用剂量【6为1．38g生药／kg，相当于临床60kg体重人使工业科技，2004；(5)：122—123用剂量(32g生~j／6Okg)的2．6倍，按照处方比例换算出栀子的4刘江亭，李慧芬，崔伟亮．大剂量栀子水煎液对大鼠胃毒性研究．山成人每日使用量为26g。实验结果提示，在含栀子的中药复方东中医杂志，2013；o4：276—277中，即使栀子的每日使

3、用量为26g也有可能产生较大的安全性5徐列明，林庆勋．正确认识中药的肝毒性．中华肝脏病杂志，2007；风险。目前，关于栀子的毒性及其毒理学机制研究较少，而配伍l5(7)：534栀子的中药复方在临床上又极其常见，特别是在某些慢性病的6Reagan—ShawS，NihalM，AhmadN．Dosetranslationfromanimalto治疗中，如慢性肝炎等。故临床上应重视含栀子中药复方的毒humanstudiesrevisited．FASEBJ．2008；22(3)：659～661性问题，急需加强相关研究，确定复方中栀子与其他药物之间四逆散对HepG2移植性肝癌裸鼠Sirtl和p53表达

4、的影响王玮，伊莉雅，高健美。(山东万杰医学院医学系，淄博255213；沈阳市胸科医院药剂科，沈阳110044；遵义医学院药学院，遵义563000)摘要目的：探讨四逆散对裸鼠移植性肝癌的抑制作用。方法：利用HepG2细胞裸鼠移植瘤模型，观察四逆散的抗肿瘤作用，采用ELISA法测定白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL．12)和肿瘤坏死因子一Of．(TNF．Of．)的水平，并用Westernblot法探讨其作用机制。结果：与模型组比较，四逆散(1．8—7．2s／kg)对荷瘤小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用，四逆散中(3．6s／ks)剂量组和高(7．2s／ks)剂量组能够明显增加活性氧(RO

5、S)的含量，并提高小鼠脾脏指数、IL-6、IL-12和TNF—Ot的水平，同时，显著下调Bcl-2、Sial蛋白表达，上调Bax、Caspase3和p53的蛋白表达。结论：四逆散能够抑制人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤生长，并通过ROS依赖的Sial—p53凋亡途径发挥作用。关键词四逆散；肝癌；ROS；Sirtl；p53四逆散为《伤寒论》名方，由甘草、枳实、柴胡和芍药组成，只，雄性，体重18～22g，由沈阳药科大学实验动物中心提供，动具有透邪解郁、疏肝理脾之功效⋯。柴胡、芍药、甘草为本方的物合格证号：SCXK(辽)2010-0005，在SPF级环境中饲养。人基本药物，柴胡辛散，芍药酸收，甘草

6、甘缓，三药配伍共奏调肝肝癌细胞HepG2购自中国科学院上海细胞库。以含10％胎牛用、,h~gt、防肝变之效。本文通过建立人肝癌细胞HepG2血清的RPMI1640培养基，于37~C、5％CO2培养箱中培养。细裸鼠移植瘤的模型，观察四逆散对移植瘤的抑制作用及机制。胞以0．25％的胰酶消化传代，平均l～2d传代一次。1．3试剂活性氧(ROS)试剂盒，超氧化物歧化酶(SOD)试1材料与方法剂盒，谷胱甘肽(GSH)试剂盒，ELISA试剂盒，Bcl-2、Bax、caspase3、Sial和p53单克隆抗体(SantaCruz)，辣根过氧化酶标1．1试验药物四逆散组成：柴胡6克、枳实6克、芍药6克记的

7、羊抗鼠IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)。·和炙甘草6克购自辽宁中医附属医院药局，经辽宁中医药大学1．4仪器YY．II28A型蛋白质电泳仪、DYY-III,lOB电泳槽英锡相教授鉴定为质量标准符合要求的道地药材。生药浸泡1(北京六一仪器厂)。h，加水煎煮2次(30rain／次)，合并两次滤液，浓缩成含生药1s／1．5方法无菌条件下将用生理盐水稀释好的人肝癌瘤株IIll的煎液，放于4冰箱备用。5-氟尿嘧啶注射液(5-F