大白菜软腐病颉颃菌筛选及其发酵条件研究.doc

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1、大白菜软腐病颉颃菌筛选及其发酵条件研究　　摘要：从大白菜软腐病的原位土壤中分离得到２４株细菌，通过平板对峙法筛选得到２株具有明显抑制作用的菌株，分别命名为ＢＲＪ１和ＢＲＪ２。通过发酵条件试验表明：两种颉颃菌均为好氧菌；其中菌株ＢＲＪ１对数生长期为０～８ｈ，在中性偏酸的环境下生长良好，适宜生长温度为３０～３５℃；菌株ＢＲＪ２对数生长期为４～１３ｈ，在ｐＨ值为４．５～９．５的条件下生长良好，最适生长温度为３２℃。共同发酵时，应在中性环境，温度控制在３２℃左右，定期翻堆以提供充足的氧气。　　关键词：大白菜；软腐病；颉颃菌

2、；发酵条件　　中图分类号：Ｓ４３６．３４１．１＋３；Ｑ９３９．１文献编识码：Ａ文章编号：0439－８11402－0281-04　　　　ＳｃｒｅｅｎｆｏｒＥｒｗｉｎｉａＣａｒｏｔｏｖｏｒａＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃＢａｃｔｅｒｉａａｎｄＳｔｕｄｙｏｎＩｔｓ　　ＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　　　　ＬＩＪｕａｎ，ＬＩＨｏｎｇ-ｌｉ，ＷＡＮＧＹａｎ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｆｔｅｒｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，２４ｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｉｎｓ

3、ｉｔｕｆｉｅｌｄ．Ｗｅｆｏｕｎｄｔｈａｔ２ｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｒａｉｎｓ，ｎａｍｅｄasＢＲＪ１ａｎｄＢＲＪ２，displayedａｐｐａｒｅｎｔａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｔｏＥｒｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａｔｈｒｏｕｇｈｐａｉｒｉｎｇｃｕｌｔｕｒｅ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ＢＲＪ１ａｎｄＢＲＪ２ｗｅｒｅｒｅｇａｒｄｅｄａｓａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉａｓ．ＡｓｆｏｒＢＲＪ１，ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｇｒｏｗｔｈｐｈａｓｅｒａｎｇｅｄｆ

4、ｒｏｍ０~８ｈ，ｔｈｅsuitablepＨｗａｓａｃｉｄｏｒｎｅｕｔｒａｌ，ａｎｄｃｕｌｔｕｒａｌｔｅｍｐｅｒｔｕｒｅｗａｓ１５~３５℃．TｈｅｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｇｒｏｗｔｈｐｈａｓｅｏｆＢＲＪ２ｗｅｒｅ４~１３ｈ，ｐＨｗａｓｆｒｏｍ４．５ｔｏ９．５，ａｎｄｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｇｒｏｗｔｈｔｅｍｐｅｒｔｕｒｅｗａｓ３２℃．Ｗｈｅｎｄｅａｌｉｎｇｗｉｔｈｂｏｔｈtwoｂａｃｔｅｒｉａｌｓｔｒａｉｎｓｉｎｃｏｍｍｏｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｎｅｕｔｒａｌｃｕｌｔｕｒａｌｅｎｖｉｒｏｎｍｅ

5、ｎｔｓｕｃｈａｓpＨ＝７．０ａｎｄｔｅｍｐｅｒｔｕｒｅｗｅｒｅｒｅｑｕｉｒｅｄ．Ｉｎａｄｄｉｔｏｎ，Ｔｈｅｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｕｒｎｉｎｇａｔｒｅｇｕｌａｒｉｎｔｅｒｖａｌｓｃｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔｏｘｙｇｅｎｆｏｒｔｈｅｃｏｕｒｓｅｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｎｅｓｅｃａｂｂａｇｅ；sｏｆｔｒｏｔ；aｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｓｔｒａｉｎｓ；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　　　　大白菜软腐病是一种由软腐欧文氏菌引起的土传病害［１，２］，为大白菜包

6、心后期的主要病害，与霜霉病和病毒病并称为大白菜的三大病害。发病时可造成大白菜严重减产，个别地区可造成大白菜绝产；窖内储存时可引起全窖腐烂；在运输和销售的过程中均可发生腐烂，造成极大的经济损失［３］。　　目前，在生产中防治大白菜抗软腐病主要采用选用抗病品种、改进栽培技术及使用化学药剂等方法［４，５］。这些方法虽然取得了一定的效果，但容易造成污染，且无法杜绝该病的发生。随着农业生产的发展，生物防治在植物病害防治工作中的作用越来越重要。直接利用颉颃菌来进行生物防治是近年来生物防治方向的研究热点之一［６-８］。目前应用较多

7、的生防细菌主要有芽孢杆菌、假单胞杆菌、土壤放射杆菌等［９，１０］。如直接向土壤中添加有益颉颃菌，颉颃菌进入土壤后会与土著微生物产生营养竞争，从而抑制其扩增，表现不出其颉颃效果。因此本试验拟将颉颃菌首先接种于腐熟的有机堆肥中扩增制成生物有机肥后再施入土壤，利用颉颃菌对病原菌的攻击、竞争作用调节土壤中微生物间的平衡，抑制病原微生物的生长，从而抑制大白菜软腐病的发生。　　本研究从软腐病发病植株原位土壤中筛选出高效、稳定的颉颃菌，并初步测定其发酵条件，为采用生物法防治大白菜软腐病研究提供有益的探讨。　　１材料与方法　　１．

8、１病株采集及病原菌的分离　　１．１．１病株采集本试验所用病株采于郑州市惠济区；选取具有典型软腐病病症的病株及其根际土壤。　　１．１．２分离方法将病株冲洗干净，在无菌条件下将病株茎部或菜叶腐烂部切成若干块，用７５％的乙醇溶液进行表面消毒，然后在无菌水中清洗，放入牛肉膏蛋白胨平板中，每皿放３～４块，重复３皿，置于３２℃培养箱中培养４８ｈ，将培养皿中靠近病株的白色