微卫星标记快速鉴别幼鱼阶段的泥鳅与大鳞副泥鳅.pdf

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1、第32卷第6期华中农业大学学报V01．32No．62013年11月JournalofHuazhongAgriculturalUniversityNov．2013，117～120微卫星标记快速鉴别幼鱼阶段的泥鳅与大鳞副泥鳅陈钢铭王卫民曹小娟华中农业大学水产学院／农业动物遗传育种与繁育教育部重点实验室／农业部淡水生物繁育重点实验室，武汉430070摘要从DDBJ数据库中选取已发表的47个泥鳅微卫星标记，在采自湖北省的大鳞副泥鳅群体中进行跨种扩增，发现有44个微卫星标记能在该群体获得扩增产物，另外有3个微卫星标记(即Ma

2、c31、Mac63和Mac541)完全不能获得扩增产物。以湖北省泥鳅和大鳞副泥鳅自交子代幼鱼DNA为模板，采用Mac31、Mac63和Mac541这3个微卫星标记的引物对进行PCR扩增，结果显示在以泥鳅自交子代幼鱼DNA为模板的体系中能扩增出目的条带，在以大鳞副泥鳅自交子代幼鱼DNA为模板的体系中完全不能扩增出目的条带。因此，Mac31、Mac63和Mac541这3个微卫星标记可用来鉴别幼鱼阶段的泥鳅与大鳞副泥鳅。关键词微卫星标记；泥鳅；大鳞副泥鳅；幼鱼；鉴别中图分类号S917文献标识码A文章编号i000～2421

3、(2013)06—0117—04对于鱼类不同物种或品系的鉴别，有效方法是类[1112]。泥鳅与大鳞副泥鳅近缘，外形相似且常常建立科学的形态学指标判别函数。李思发【I1伽曾对同域存在[】引，人们常利用一些形态学指标来区分它不同团头鲂种群和尼罗罗非鱼品系的形态学判别函们，例如泥鳅背鳍之前略呈圆筒形，背鳍之后侧扁，数进行了分析研究。然而，许多种鱼类(尤其是小型而大鳞副泥鳅体侧扁，且越靠近尾鳍越侧扁；另外还鱼类)在仔、稚、幼鱼阶段规格比较小，因而较难建立有泥鳅体被细鳞，大鳞副泥鳅的鳞片较泥鳅大准确的形态学判别函数来进行物种

4、或品系的鉴别。等[1。但是，对于泥鳅和大鳞副泥鳅的幼鱼，人们因此，要进行早期的物种鉴别，一般需要开发一些有很难通过形态学指标对其进行区分。本研究选取已效的分子标记。现今，多种分子标记，如限制性片段发表的47个泥鳅SSR标记，在大鳞副泥鳅群体中长度多态性标记(RFLP)、扩增片段长度多态性标进行跨种扩增，筛选出不能获得扩增产物的SSR标记(AFLP)和随机扩增多态性DNA标记(RAPD)记，然后将这些标记放在泥鳅和大鳞副泥鳅自交子已经广泛应用于动植物的物种鉴别研究中[3。]，然而代幼鱼中进行检测，旨在获得能够用于鉴别

5、幼鱼阶段这些标记在实际应用中操作起来较为烦琐。微卫星泥鳅和大鳞副泥鳅的SsR标记，为今后这2种鳅类的标记(SSR)不仅具有RFLP的优点，而且还操作简群体遗传学和种群保护研究提供有效的分析工具。便、快速和经济，这使得SSR成为物种和品系鉴别1材料与方法研究中使用最为广泛的一种分子标记[8。。。泥鳅(Misgurnus彻gmn￡s)与大鳞副1．1材料泥鳅(Paramisgurnusdabryanus)分别隶属于鳅科试验所用的泥鳅与大鳞副泥鳅成鱼购买自湖北泥鳅属和副泥鳅属，广泛分布于中国、日本、朝鲜、俄省武汉市白沙洲水

6、产品市场。罗斯及印度等地。在我国除青藏高原外，全国各地1．2泥鳅与大鳞副泥鳅自交子代的繁殖与养殖河川、沟渠、水田、池塘、湖泊及水库等天然淡水水域挑选性成熟的雌性(25．1～48．3g)和雄性中均有分布，尤其在长江和珠江流域中下游分布极(11．3～28．4g)泥鳅及大鳞副泥鳅，注射催产激素广，群体数量大，是我国2种重要的小型淡水经济鱼LHRH～A2(20~g／kg)和DOM(4mg／kg)，约12h收稿日期：2013—03—29基金项目：国家自然科学基金项目(31201719)陈钢铭，硕士研究生．研究方向：鱼类遗传育

7、种．E-mail：1835093916@qq．corn通讯作者：曹小娟，博士，讲师．研究方向：水产养殖与遗传育种．E-mail：caoxiaojuan@mail．hzau．edu．cn118华中农业大学学报第32卷后进行人工授精，获得泥鳅和大鳞副泥鳅自交子代。库和Morishima等[¨]的研究报道。47个微卫星标将泥鳅与大鳞副泥鳅的子代分别置于1．0rn×记的引物对由上海生物工程服务有限公司合成。0．5m的长方形塑料水箱中饲养。PCR反应的总体积为10L，其中含100ng／~L的1．3基因组DNA的提取模板DNA

8、0．5L，1．0L的10×Buffer(含剪取4O尾泥鳅成鱼和4O尾大鳞副泥鳅成鱼的Mg十)，0．2L的10mmol／LdNTPs，0．1L的鳍条，另外随机剪取8尾泥鳅幼鱼(0．21±0．013g)0．5U／#L的TaqDNA聚合酶，10／~mol／L正向及和8尾大鳞副泥鳅幼鱼(0．23±0．011g)的鳍条，所反向SSR引物各0．25L。PCR循环参数为：