发根土壤杆菌介导的大豆发根转化体系改进-论文.pdf

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1、第33卷第2期大豆科学Vo1．33N0．22014正4月SOYBEANSCIENCEApr．2014发根土壤杆菌介导的大豆发根转化体系改进徐建美，杨巧，李硕，刘倩，简恒(中国农业大学植物病理学系，北京100193)摘要：鉴于大豆难以获得转基因植株的现实，借鉴Kereszt等建立的发根土壤杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)K599介导的大豆转化体系，并针对实验中遇到的具体问题，对原体系进行了适当改进。结果表明：改进的体系操作更简单，对发根培养条件、人员操作技能要求更低，所形成的植株更具生命力。

2、同时，应用改进体系以及RNAi技术，构建了表达线虫特异基因dsRNA的转基因发根植株，可在60d内在转基因大豆发根上对植物线虫基因的RNAi效果完成验证。改进的体系为培育抗大豆胞囊线虫品种奠定了基础。关键词：大豆；发根土壤杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)K599；RNA干扰；遗传转化中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000．9841(2014)02-0161-07ImprovementofSoybeanHairy·rootSystemMediatedbyAgrobacter

3、iumRhizogenesXUJian—mei，YANGQiao，LIShuo，LIUQian，JIANHeng(DepartmentofPlantPathology，ChinaAgiculturalUniversity，Beijing100193，China)Abstract：InconsiderationofthefactthatitiSdifficulttoacquiretransgenicsoybeanplants．weestablishedatransformationsystemofsoybeanm

4、ediatedbyAgrobacteriumrhizogenesK599accordingtothemethodofKereszteta1．，andimproveditbe—causeofsomespecificquestionsinexperiment．Theimprovedtransformationsystemandtheoriginalonewerecompared．TakeadvantageoftheimprovedsystemandRNAitechnology，transgenichairy-roo

5、t·plantsthatexpressingnematodedsRNAofspecibiCgeneswereconstructedandtheRNAieffectsofthesegenescouldbetestedwithin60daysonthetransgeniehairyroots．TheresultsindicatethattheimprovedsystemiSeasiertomanipulate，havelessdemandstoenvironmentconditionsandpersonnelski

6、llinglevels，andimprovethevitalityofacquiredplants．Ourresultsestablishedthefoundationforbreedingnewcropcultivarswithhighlyresistanttosoybeancystnematode．Keywords：Soybean；AgrobacteriumrhizogenesK599；RNAinterference(RNAi)；Genetictransformation在研究基因功能和基因工程方面，遗传转

7、化有着线虫关键基因可以转入大豆中以得到转基因大豆极其重要的作用。为将目的基因转入植物，在一些物种子进行进一步研究。种中，发展了既简单又快速的发根土壤杆菌(Agrobac—本文借鉴Kereszt等¨。。的方法，建立了利用发teriumrhizogenes)介导的转化法。该法可以用于生产根土壤杆菌(A．rhizogenes)K599介导的大豆发根转次级代谢物4。，鉴别启动子J，根据根的发育情况分化体系，但在实验中遇到了发根形成对湿度要求高析基因功能_6以及重建整个植株等。但某些植而不利于植株地上部分健壮生长、继而影

8、响到移栽物，如大豆(GlycineL_Merril1)的转化效率仍较后植株正常生长不能完成线虫侵染等具体问题。低。近年来新开发的一种转化方法能够显著地减少为此，对原体系进行了改进，并对改进前后两体系形成转基因植物组织所消耗的时间，利用此方法形成进行了比较，利用改进体系以及RNAi技术构建的一种“嵌合体”植株，其由野生型的非转基因茎叶系表达线虫特异基因dsRNA的转基因发根植株，可以统和