植物罹病组织中象耳豆根结线虫的LAMP快速检测方法-论文.pdf

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1、中国农业科学2013，46(3)：534．544ScientiaAgriculturaSinicadoi：10．3864~．issn．0578-1752．2013．03．010植物罹病组织中象耳豆根结线虫的LAMP快速检测方法何旭峰，彭焕，丁中，贺文婷，黄文坤，彭德良(‘中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193：湖南农业大学生物安全科技学院，长沙410128)摘要：【目的】建立一种基于环介导等温扩增(Loop-mediatedisotherma1amplification，LAMP)技术，

2、从植物罹病组织中直接检测象耳豆根结线虫(Meloidogyneenterolobii)的快速检测方法，为象耳豆根结线虫的监测和防治提供技术支持。【方法】根据象耳豆根结线虫与其它根结线虫ITS序列差异设计LAMP特异性引物，通过对LAMP反应条件中的Mg、dNTPs、甜菜碱和反应时间进行优化，同时对检测体系的特异性和灵敏度进行验证，建立一种从罹病植物组织中检测象耳豆根结线虫的LAMP快速检测方法。【结果】象耳豆根结线虫LAMP检测体系优化结果表明在Mg的浓度为5．0mmol·L～、dNTPs的浓度为2．4mmol·L～、不添加

3、甜菜碱、反应时间为45min的条件下，扩增效率最优。本研究建立的LAMP检测方法能够从11个植物线虫种群中特异检测出象耳豆根结线虫，检测灵敏度为1／200000头线虫DNA，比普通PCR灵敏100倍，能够直接从植物根结中检测出象耳豆根结线虫，准确度为100％。【结论】本研究以rONA—ITS序列为靶基因建立象耳豆根结线虫LAMP快速分子检测方法，具有特异性强、灵敏度高、简单、快速、经济等特征，能够从罹病植物组织中快速准确地检测出象耳豆根结线虫，具有极高的实践应用价值。关键词：象耳豆根结线虫；环介导恒温扩增；特异性；灵敏度；快

4、速检测Loop—MediatedIsothermalAmplificationAssayforRapidDiagnosisofMeloidogyneenterolobfiDirectlyfrOmInfectedPlantsHEXu．feng，PENGHuan，DINGZhong，HEWen．ting，HUANGWen-kun，PENGDe．1iang(StateKeyLaboratoryforBiologyofPlantDiseasesandInsectPests，InstituteofPlantProtection，Chi

5、neseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193；CollegeofBiosafetyScienceandTechno~gy,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128)Abstract：[Objective]TheobjectiveofthisstudyistoestablisharapiddiagnosticmethodforMeloidogyneenterolobiifromtheinfectedplantsbasedonthelo

6、op—mediatedisothermalamplification(LAMP)，andtoprovidetechnicalsupportsformonitoringandpreventionofM．enterolobii．[Method]TheLAMPspecificprimersweredesignedaccordingtothedistinctionoflTS(intemaltranscribedspacer)sequencesbetweenenterolobiiandotherMeloidogynespp．．Ther

7、eactionconditionsofLAMP,includingtheconcentrationsofM，dNTPs，betainandreactiontimeswereoptimized，andthespecificityandsensitivityoftheLAMPweretestified．ArapidmethodforenterolobiifrominfectedplantsbyLAMPWasestablishedonthisbasis．[Result]TheoptimumconditionsforLAMPreac

8、tioncouldbecarriedoutundertheconcentrationsof5．0mmol·L。Mg抖and2．4mmol·L～dNTPs．withoutbetainand45minutesofreaction．Themethoddevelopedinthispaperwas