《非活性人细胞依赖型血型抗原的研究及应用》.pdf

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1、中国免疫学杂志2015年第31卷doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2015．02．029非活性人细胞依赖型血型抗原的研究及应用①丁少华蒙青林魏双施李勇(中科院苏州生物医学工程技术研究所，苏州215163)中图分类号R446．1文献标志码A文章编号1000-484X【2015)02-0274-04长期以来，在医学临床常规的血型抗体检测工种形式。具有复杂结构的多次跨膜蛋白很难以可溶作中存在抗原缺乏的困难，由于对活性细胞的依赖，性形式表达，但可在真核细胞系中以膜蛋白的形式使得血型相容性检测技术落后于临床上同种异型免表达。Rhesus、Dufly及K

2、idd等血型抗原已经被成疫性疾病的诊断、治疗的需求。近年来人们已经功地以膜结合的形式在真核细胞系中表达，并被应对绝大多数血型抗原编码基因、抗原分子以及抗原用于对应抗体的检测』。Seltsam等证实表达于载体的组成和结构等都有了十分清楚的认识，不依真核细胞系表面的Kell、Fya抗原在固相抗体检测赖活性人血液细胞的血型抗原的研究成为血液免疫中展示了良好的特异性和敏感性。可溶性重组血型学领域的重点研究方向之一，目前主要研究项目有：蛋白的应用则更为广泛。单次跨膜蛋白和具有单个①重组表达血型抗原；②化学合成血型抗原多肽；③细胞外区域的糖基化磷脂酰肌醇(GPI)连接蛋白是适配

3、体技术筛选的血型模拟抗原；④纳米磁珠细胞以可溶性重组蛋白表达的典型代表。Sehsaml71和膜抗原等。所研制的这些血型抗原的特点是不依赖Ridgwell等证实基于可溶性重组血型蛋白的活性人细胞，但其抗原性与活性细胞上对应抗原的ELISA法能提高抗体检测的灵敏性，可以检测到血抗原性一致，与特异性抗体发生反应。本综述将上凝实验检测不到的低效价抗体，从而减小迟发型溶述四种血型抗原概括为“非活性人细胞依赖型血型血性输血反应的风险。Sehsam等将可溶性重组抗原”，并对其研究内容和应用进展做一简单介绍。蛋白JMtt连接到微球表面，以微柱凝胶法检测抗．JMH抗体。连有重组蛋白的

4、微球也可以用于流式1重组血型抗原细胞仪检测抗体j。Sehsam等“首次证明可溶1．1重组红细胞血型抗原红细胞血型血清学中，性重组血型蛋白可以用于检测相应的抗体及含有该普遍认为血型抗原的形成主要取决于对应血型蛋白抗体的混合抗体，并且含有单个或数个可溶性重组的三维结构，由膜蛋白的类型(如单次或多次跨血型蛋白的试剂能满足血清实验室的常规应用。可膜)、翻译后修饰的类型(如糖基化或二硫键)以及溶性血型抗原的保存时问比活性红细胞长，且保存两个或多个红细胞膜蛋白之间的相互作用的类型来时间可通过冻干的方法进一步延长。决定。使用何种蛋白表达系统表达血型蛋白在很大1．2重组血小板抗原血

5、小板抗原存在于血小板程度上决定于该蛋白的拓扑学结构。真核表达系统膜表面的蛋白质和多糖分子上，血小板同种异体抗具有翻译后修饰体系，如糖基化和二硫键的形成等，原主要是HLA抗原、ABH抗原、HPA和CD36等。能表达正确折叠的蛋白质。原核表达系统因不具有HlLA、ABO和CD36抗原不只是存在于血小板膜上，翻译后修饰体系，在该系统中所表达的蛋白可能不同时也广泛存在于人体其他组织和细胞上。使用血具有天然蛋白的结构。但原核表达体系的表达效率小板检测抗一HPA抗体和抗一CD36会受到样本中更高，更经济。HLA抗体的干扰。Hayashi等将含有CD36基因重组红细胞血型抗原有膜

6、蛋白和可溶性蛋白两的慢病毒载体转染K562细胞，可获得稳定、高效表达CD36的细胞株。流式细胞仪检测结果显示该细①本文为江苏省自然科学基金青年基金(BK20130343)和苏州市医胞能特异地检测出抗一CD36。因K562细胞自身不疗器械与新医药专项基金资助项目(ZXY2013017)。表达HLA、HPA，待检样本中的抗HLA抗体和抗作者简介：丁少华(1982年一)，女，博士，副研究员，主要从事血液免HPA抗体不会造成结果假阳性。利用同样的方法，疫学和免疫遗传学研究。Hayashi等H还建立了检测抗HPA．1、HPA．3、通讯作者及指导教师：李勇(1952年一)，男，

7、博士，教授，博士生导师，主要从事血液免疫学和免疫遗传学研究，HPA-6、HPA一7、HPA-4及HPA一15的K562细胞系谱E—mail：szliyong@sibet．ac．ca。细胞。用细胞株谱细胞和使用传统血小板谱细胞进丁少华等非活性人细胞依赖型血型抗原的研究及府用第2期行MAIPA检测所得的结果在特异性和敏感性上没胞外区多肽，用于筛选IIb[33蛋白的拮抗剂。经有差异，表明建立的细胞株谱细胞可以高度敏感地流式细胞仪检测合成的多肽是否能通过阻止仅1I检测抗血小板特异性抗体。Kroll等建立表达血b133蛋白与FITC标记的Fg的结合而抑制血小板的小板特异性