资源描述：
《临床医学毕业论文腹腔内注射腺苷对大鼠海马区cfos表达的影响.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、XX大学毕业论文腹腔内注射腺昔对大鼠海马区Cfos表达的影响2014年6月25日腹腔内注射腺昔对大鼠海马区cfos表达的影响作者：付立波王学斌刘风莲宋迎【摘要】F1的研究腹腔内注射腺昔对大鼠海马区cfbs蛋白表达的影响。方法腹腔内注射腺昔和其非特异性受体阻断剂茶碱，采用Fos免疫组织化学染色(ABC法)，观察cfos蛋白在海马区内的分布情况。结果注入腺昔后大鼠海马区的cfos蛋白表达与注入生理盐水相比明显增加，注入茶碱后大鼠海马区的cfos蛋口表达与对照组相比无显著变化。结论腺昔能促进海马区cfos蛋白的表达
2、，腺昔在海马区内对调节睡眠可能有重要作用。【关键词】腺昔；海马区；cfos；免疫组织化学染色法腺昔(Adcnoisinc,Ado)作为中枢神经系统(CNS)的一种神经调质，可降低CNS神经元的兴奋性,在中枢许多部位具有抑制作用(1,2)oAdo在CNS屮直接或间接参与睡眠、镇静和镇痛等作用，是重要的睡眠调节因子之一。在缺血、缺氧和血流灌注不足的情况下，大脑屮的Ado浓度迅速上升，内源性Ado对代谢增加和能量不足引起的纽织损伤具有保护作用，对睡眠具有促进作用。许多睡眠因子，如白介素(IL)1,褪黑素等，通过使C
3、NS内cfos蛋白及cfosmRNA表达水平提高促进睡眠⑶。海马区是重要的屮枢部位，cfos基因在海马组织受到轻微刺激吋就能表达。本实验采用腹腔内注射Ado和免疫组织化学方法，观察Fos蛋白在海马区的分布情况，为进一步明确Ado在大鼠海马区对睡眠的调节提供理论依据。1材料与方法1.1动物与试剂采用200〜250g雄性纯种Wistar大鼠30只(由吉林大学动物实验屮心提供），随机分三组，每组8只，即注入Ado组、注入茶碱组和注入生理盐水组（对照组）。每口对大鼠进行3次抓拿训练，连续训练1w,以减少大鼠对抓拿反应
4、的影响。Ado、茶碱由Sigma公司提供；过氧化酶阻断剂、菲免疫动物血清、氧化酶阻断溶液、兔抗人cfos多克隆抗体、50pl生物素、50pl链霉菌抗生物素均由福州迈新生物技术开发有限公司提供。1.2方法1.2.1装片制备将分组后的大鼠分别注入相应药剂，注入吋间为1h,然后立即将大鼠麻醉，随即开胸，经左心室灌注生理盐水100ml,继以灌注含4%多聚甲醛的0.1mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）500ml进行固定，60min后断头，取出脑组织，置于含4%多聚甲醛的PBS（O.lmol/L）'
5、'后固定2d,取相应海
6、马区的脑组织块,用石蜡包埋，修块，并用LKBIII型超薄切片机切成5〜8pm切片。1.2.2Fos免疫组织化学染色（ABC法）将石蜡切片脱蜡和水化，之后用PBS（0.01mol/L,pH7.4）冲洗3次，每次3min。在每张切片上加一滴过氧化酶阻断剂（试剂A）,即用抗原修复液对组织抗原进行修复，室温下孵育15min。取出切片，每张切片加50pl过氧化卿阻断溶液（抗体），室温下孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3次，每次3min0甩去PBS,每张切片加50川止常非免疫动物血清（试剂B）,室
7、温下孵育30mine除去血清，每张切片加50pl的兔抗人cfos多克隆抗体，4°C过夜。PBS冲洗3次，每次3〜5mine除去PBS,每张切片加50卩1生物索标记的第二抗体（试剂C）,室温下孵育lOminoPBS冲洗3次，每次3min。除去PBS,每张切片加50pl链霉菌抗牛物索过氧化酶溶液（试剂D）,室温下孵育10minePBS冲洗3次，每次3min。除去PBS,每张切片加100新配制的二氨基联苯胺（DAB）溶液，观察3〜10mine自來水冲洗，苏木素复染，PBS冲洗返蓝。切片经过梯度酒精脱水干燥，二甲苯透
8、明，屮性树胶封固。1.2.3结果判断细胞质屮有红色颗粒者为阳性细胞，每貝人鼠随机取5张切片，在400倍镜下计数核团内一个视野的Fos免疫反应阳性神经元（foslike）的数量，取其平均数。在观察切片吋，每张切片计数3个高倍镜视野。1.3统计学分析采用SPSS11.0软件进行分析，计量数据以x±s表示，两组间均数用配对样品t检验进行显著性比较。2结果大鼠腹腔内注入Ado后，海马区内cfos蛋白表达为28.6%±8.37%,而注入生理盐水组cfos蛋白表达为16.4%±6.23%,二者相比统计学差异极显著（P0.
9、01）；腹腔内注入茶碱后海马区内cfos蛋白表达为17.3%±9.49%,与注入生理盐水组相比无统计学差并（P0.05）；注入Ado组cfos蛋白量与注入茶碱组相比，统计学差异极显著（P0.01）,表明大鼠腹腔内注入Ado后cfos蛋白表达明显增加，注入茶碱后cfos蛋白表达增加不明显，即Ado促进cfos蛋白表达。见图lo3讨论Ado的生理作用广泛，且与其介导的受体有关。Ado受体有AIR、A2A
