色谱法分离原理-(2).ppt

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1、第18章色谱法分离原理18.1概述色谱法或层析法(chromatography)，是一种物理或物理化学分离分析方法。原理：利用物质在固定相和流动相中的分配系数不同，使混合物中的各组分分离。以前学过的分离方法有：1.沉淀法是利用物质溶解度的不同而进行分离。2.蒸馏法是利用有机物沸点的差异进行分离。3.萃取法是利用组分在水相和有机相（互不相溶）中的分配素数不同进行而分离。一色谱分析法简介色谱法创始于20世纪初，1906年俄国植物学家Tsweet将碳酸钙放在竖立的玻璃管中，从顶端倒入植物色素的石油醚浸取液，并用石油醚冲洗。MichaelTswett(1872-191

2、9),aRussianbotanist,discoveredthebasicprinciplesofcolumnchromatography.Heseparatedplantpigmentsbyelutingamixtureofthepigme--ntsonacolumnofcalciumcarbonate.Thevariouspigmentsseparatedintocoloredba--nds;hencethenamechromatography.植物色素分离图示二色谱法分离原理分离原理:物质的分配系数差异。三色谱法分类色谱法可从不同的角度进行分类：1.按

3、流动相与固定相的分子聚集状态分类在色谱法中流动相可以是气体、液体和超临界流体(gaschromatography,GC、liquidchromatography,LC、supercriticalfluidchromatography,SFC)。按固定相为固体(如吸附剂)或液体，气相色谱法又可分为GSC与GLC；液相色谱法又可分为LSC及LLC。2.按操作形式分类柱色谱法(columnchromatography)是将固定相装柱管内构成色谱柱，色谱过程在色谱柱内进行。按色谱柱的粗细等，又可分为填充柱(packedcolumn)色谱法、毛细管柱(capillary

4、column)色谱法及微填充柱(microborepackedcolumn)色谱法等类别。3.按色谱过程的分离机制分类可分为分配色谱法(partitionchromatography)、吸附色谱法(adsorptionchromatography)、离子交换色谱法(ionexchangechromatography，IEC)、空间排阻色谱法(stericexclusionchromatography，SEC)及亲合色谱法(affinitychromatography)等类型。色谱法简单分类如下表:18.2色谱法基础知识、基本概念和术语18.2.1色谱流出曲线:

5、一基线在实验条件下，色谱柱后仅有纯流动相进入检测器时的流出曲线称为基线。使基线发生细小的波动的现象称为噪音。基线在稳定的条件下应是一条水平的直线。它的平直与否可反应出实验条件的稳定情况。二峰高（h）色谱峰顶点与基线的距离叫峰高。可用mm,mV,mA表示。h宽度越窄，其效率越高，分离的效果也越好。区域宽度通常有三种表示方法：标准偏差：峰高0.607倍处峰宽处的一半。半峰宽W1/2：峰高一半处的峰宽。W1/2=2.354峰底宽W：色谱峰两侧拐点上切线与基线的交点间的距离。W=4三区域宽度四色谱峰面积A色谱峰与峰底基线所围成区域的面积叫峰面积。对于对称的色谱峰

6、A=1.065hW1/2对于非对称的色谱峰A=1.065h(W0.15+W0.85)/2五保留值组分在色谱柱中停留的数值，可用时间t和所消耗流动相的体积来表示。固定相、流动相固定，条件一定时，组分的保留值是个定值。(1)比移值Rf=ux/u=nm/(nm+ns)(2)死时间(tM)不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间。它与色谱柱的空隙体积成正比。(3)保留时间tR试样从进样到出现峰极大值时的时间。(4)调整保留时间某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，它是组份在固定相中的滞留时间。即(5)死体积VM色谱柱管内固定相颗粒间空隙、色谱仪管路和连接头间

7、空隙和检测器间隙的总和。忽略后两项可得到：(6)保留体积VR指从进样到待测物在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。其中，Fco为柱出口的载气流速（mL/min)(7)调整保留体积某组份的保留体积扣除死体积后的体积。tM﹑VM与被测组分无关，因而·更合理地反映了物质在柱中的保留情况。(8)相对保留值r2,1组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比。r2,1只与柱温和固定相性质有关，而与柱内径、柱长L、填充情况及流动相流速无关，因此，在色谱分析中，尤其是GC中广泛用于定性的依据！具体做法：固定一个色谱峰为标准s，然后再求其它峰i对标准峰的相对保留值，此时以

8、表示：>1,又称选择因子（9）保留