乙肝疫苗说明书.pdf

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1、重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母)取种子批菌种扩增培养，采用适宜的方法将培养后重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）的细胞破碎，测定破碎液的蛋白质含量（附录WB第二法），并采用酶联免疫法或其他适宜方法测定HBsAg含ChongzuYixingGanyanYimiao(NiangjiuJiaomu)量。抗原表达率应不低于0.5%,RecombinantHepatitisBVaccine(Saccharomycescerevisiae)抗原表达率（％)=s&m-?mxm2.1.4菌种保存本品系由重组酿洒酵母表达的乙型肝炎（简称乙肝）主种子批和工作种子批菌种应于液氮中保存，工作病毒表面抗原（HBsAg)经纯化

2、，加人铝佐剂制成'用种子批菌种于-70"C保存应不超过6个月。于预防乙型肝炎.2.2原液1基本要求2.2.1发酵生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物取工作种子批菌种，于适宜温度和时间经锥形瓶、种等应符合"凡例"的有关要求.子睐和生产«1进行三级发酵，收获的酵母菌应冷冻保存，2制造2.2.2培养物检定2.1生产用菌种2.2.2.1培养物纯度2.1.1名称及来源按2.1.3.1项进行。生产用菌种为美国默克公司以DNA重组技术构建的2.2.2.2质粒保有率表达HBsAg的重组酴酒酵母原始菌种，菌种号为21502-按2.1.3.3项进行，应不低于90%。3(pHBS56-GAP347/

3、33)„2.2.3培养物保存2.1.2种子批的建立于-60*C以下保存不超过6个月。应符合"生物制品生产检定用菌毒种管理规程"2.2.4纯化规定。用细胞破碎器破碎醸酒酵母，除去细胞碎片，以硅胶由美国默克公司提供的菌种经扩增1代为主种子批，吸附法粗提HBsAg,疏水色谱法纯化HBsAg,用琉氛酸主种子批扩增1代为工作种子批。盐处理，经稀释和除菌过滤后B卩为原«•>2.1.3种子批菌种的检定2.2.5原液检定主种子批及工作种子批应进行以下全面检定。按3.1项进行，2.1.3.1培养物纯度2.2.6原液保存培养物接种于哥伦比亚血琼脂平板和癍化大豆蛋白于2~8"C保存不超过3个月。琼脂平板，分别

4、于20~25"C和30～35*C培养5~7天，应2.3半成品无细菌和其他真菌被检出。2.3.1甲醛处理2.1.3.2HBsAg基因序列测定原液中按终浓度为lOOjug/ml加入甲酵，于371C保温HBsAg基W序列应与原始菌种2150"2-3保持一致。适宜时间，2.1.3.3质粒保有率2.3.2铝吸附采用平板复制法检测。将菌种接种到复合培养基上每lfig蛋白质和铝剂按一定比例置2～8(吸附适宜培养，得到的单个克隆菌落转移到限制性培养基上培养，的时间，用无菌生理氣化钠溶液洗涤，去上清液后再恢复计算质粒保有率，应不低于95%。至原体积，即为铝吸附产物.PR(%)=X1002.3.3配制蛋白质

5、浓度为20.0~27.Ojxg/ml的铝吸附产物可与式中PR为质粒保有率，％;铝佐剂等量混合后，即为半成品，A为在含腺嚓呤的基本培养基上生长的菌落数，2-3.4半成品检定CFU/皿；按3.2项进行。A+L为在含腺噪呤和亮氨酸的基本培养基上生长2.4成品的菌落数，CFU/皿。2.4.1分批2.1.3.4活菌率应符合"生物制品分批规程"规定，采用血细胞计数板，分别计箅每lml培养物中总菌2.4.2分装数和活菌数，活菌率应不低于50%。应符合"生物制品分装和冻干规程"规定，活菌率（％)=

6、

7、

8、xioo2.4.3规格2.1.3.5抗原表达率每瓶0.5ml或1.Oml,每1次人用剂量0.5ml，含

9、‧126‧重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母)HBsAg5^g或lOjug;或每1次人用剂量1.0ml,含硼酸盐缓冲液（pH9.2)0.5ml,2.25%氯胺T-0.9%氣HBsAg10ng。化钠溶液0.5ml,50%吡啶溶液（用牛理氣化钠溶液配2.4.4包装制）1.0ml，每加一种溶液后立即混匀，加完上述溶液后应符合"生物制品包装规程"规定。静置10分钟，以生理氣化钠溶液为空白对照，在波长3检定415nm处测定各管吸光度.以标准溶液中硫氰酸盐的含量对其吸光度均值作直线回归，计箅相关系数，应不低于3.1原液检定0.99,将供试品上清液的吸光度均值代人直线回归方程，3.1.1无菌检査计箅硫氰酸盐含

10、S,应小于1.0pg/ml。依法检査（附录)01A),应符合规定。3.2.2.2TritonX-100含g3.1.2蛋白质含S应为20.0～27.(Vg/ml(附录MB第二法）。将供试品于6500g离心5分钟，取上清液。分别取含3.1.3特异蛋白带量为5f«g/ml、lO^g/mK20;zg/ml、30/ig/ml、40^g/ml的TritonX-10O标准溶液、供试品上潸液、生理氣化钠溶液采用还原型SDS"聚丙烯酰胺凝胶电泳法（附