食品安全检验综合实验指导书副本.doc

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1、食品安全检验综合实验实验指导书食品科学与工程实验室徐君飞实验一食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。适用于食品中菌落总数的测定。2菌落总数食品检样经过处理，在一定条件下<如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g

2、及吸头。p1EanqFDPw3.8无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。3.9无菌培养皿：直径90mm。3.10pH计。3.11放大镜或/和菌落计数器。4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基：见附录A中A.1。4.2磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2。4.3无菌生理盐水：见附录A中A.3。5操作步骤5.1样品的稀释5.1.1固体和半固体样品称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，制成1:10的样品匀液。DXDiTa9E3d5.1.2液体样品以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或

3、生理盐水的无菌锥形瓶<瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。RTCrpUDGiT5.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中<注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。5PCzVD7HxA5.1.4按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。jLBHrnAILg5.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2~3个适宜稀释度的样品匀液<液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释

4、时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。xHAQX74J0X5.1.6及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基<可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。LDAYtRyKfE5.2培养待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。5.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位

5、~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。dvzfvkwMI15.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。rqyn14ZNXI5.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。6结果与报告6.1菌落总数的计算方法6.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，

6、计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每gd式中：N——样品中菌落数；∑C——平板<含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1——第一稀释度<低稀释倍数）平板个数；n2——第二稀释度<高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子<第一稀释度）。6.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。SixE2yXPq56.1.4若所

7、有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.1.5若所有稀释度<包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6ewMyirQFL6.2菌落总数的报告6.2.1菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整